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電泳槽清洗部件:
電泳槽部件組裝前要*清洗干凈。尤其是玻璃板及凹形帶槽橡膠框,必須用泡沫海綿沾少許肥皂粉或洗滌劑*清洗干凈。清洗后的玻璃板應(yīng)放在玻璃板支架上晾干水后方能使用。
A組裝電泳槽
1、將四只固定螺桿插進一只貯液框(半上槽)的相應(yīng)孔洞中,然后將貯液框仰放在桌上。
左手拿凹型槽橡膠模框,右手的拇指與中指握住玻璃板的兩側(cè)邊緣插到橡膠模框內(nèi) (注意手指不能接觸灌膠面的玻璃板)。
將帶有玻璃的橡膠模框子放在仰放的貯液槽框架上,其下緣必須對齊貯液槽框下緣。
雙手拿另一只貯液槽框與仰放在桌上的貯液槽框相合,并使橡膠框上的凸出線位于貯液槽有機玻璃框中央。
裝上四只螺母,擰緊螺絲。注意擰緊螺絲時用力應(yīng)均勻,用雙手按斜角位置雙雙逐漸擰緊。
將電泳槽垂直豎起,放在桌上,帶短玻璃板的貯液槽稱上槽(陰),帶長玻璃板的貯液槽稱為下槽(陽),在長玻璃板與橡膠框間有一縫隙。此縫隙可用已熔化的10%瓊脂沿長玻璃板下端灌入,為防止留存氣泡,可稍抬起一端即可趕去氣泡。待瓊脂*凝固后才能灌膠。
也可將槽垂直豎起,將帶有玻璃的橡膠??蛑苯臃湃氩壑校瑢ΨQ擰緊螺絲后,用瓊脂封底邊。
B灌膠
先灌分離膠,待凝固后再灌濃縮膠。灌膠前接通冷卻水,夾緊連接上下貯液槽的兩根橡膠管。
用細頭滴管吸取膠液,沿長、短玻璃板中間縫隙從一端加入膠液。為防止產(chǎn)生氣泡,可稍拾起另一端(氣泡往高處走),不斷加入膠液。若單層膠(分離膠)則加膠量約距離短玻璃板上端0.3厘米處,輕輕加少許水,雙手輕輕將梳子插入,待膠凝后就可形成凹形加樣孔。
為防止漏膠,在上、下貯液槽中立即加入蒸餾水,但蒸餾水不能*過短玻璃板上緣。
膠凝固后即可看到樣品槽梳子與凝膠板間有一層折射率不同的亮區(qū)。
C加樣
松開連接上、下貯液槽兩根橡皮管上的夾子,放掉槽內(nèi)的蒸餾水,待水流完后,再夾緊夾子。
雙手輕輕取出樣品梳子,即可看到界線清楚的加樣孔,將孔中水分吸去(注意千萬不要碰壞孔沿的字面)。
在上、下貯液槽中加入緩;中液,液體高度應(yīng)*過上貯液槽短玻璃板上緣。
用微量注射器吸取一定量的樣品加到長、短玻璃板間的凹型凝膠樣品孔內(nèi)(注意加樣動作要輕,針頭不能碰壞膠面)。
D電泳
一貯液槽導(dǎo)線與電泳儀的負極相連,下貯液槽導(dǎo)線與電泳儀的正極相連。檢查線路無誤,方可按照所要求的電壓電流進行電泳。
E取出膠板
電泳結(jié)束,旋松螺母,取出膠框,剝出玻璃板,在兩塊玻璃板下角空隙內(nèi),用刀片背面輕輕撬動,即可將膠面與一塊玻璃板分開,將有膠板的玻璃板平放在桌上,雙手輕輕沿凝膠底將膠片托起,放在大培養(yǎng)皿中染色,膠板經(jīng)漂洗、脫色后即可看到清晰的分離條帶。
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