ABI Veriti 梯度PCR儀操作方法

PCR技術(shù)是一種分子生物學(xué)技術(shù)，用于在幾個(gè)數(shù)量級(jí)上擴(kuò)展一段DNA的一個(gè)或幾個(gè)拷貝，復(fù)制數(shù)千到數(shù)百萬(wàn)個(gè)DNA序列。作為一種廉價(jià)但可靠的方法，能夠重復(fù)復(fù)制DNA的聚焦片段。ABI公司的PCR儀器在行業(yè)內(nèi)受到普遍的歡迎。今天小編 Veriti 梯度PCR儀為例就為您簡(jiǎn)單介紹一下具體的操作方法。

步驟：

1、打開(kāi)PCR儀的熱蓋，插入0.2ml的樣品管，蓋好熱蓋；

2、打開(kāi)PCR儀的電源，儀器程序開(kāi)始初始化，需等待幾分鐘；

3、初始化完成后，顯示主菜單；

4、點(diǎn)“Browse/New Methods”，進(jìn)入PCR程序列表；

5、可以直接點(diǎn)一個(gè)PCR程序，選擇“Start Run”運(yùn)行；點(diǎn)右邊的符號(hào)，可以選擇不同的文件夾。如要新建一個(gè)PCR程序，點(diǎn)“New”，出現(xiàn)PCR程序；

6、添加一段程序：點(diǎn)中上方的“Stage”位置，該位置變紅；再點(diǎn)“Add”，軟件將加入一段新的程序；

7、修改循環(huán)數(shù)、溫度、時(shí)間：點(diǎn)中循環(huán)次數(shù)、溫度或時(shí)間位置，下方出現(xiàn)數(shù)字鍵。依次點(diǎn)數(shù)字鍵，出現(xiàn)合適數(shù)字后，點(diǎn)“Done”確定；

8、增加一個(gè)步驟：點(diǎn)“Step”位置，該位置變紅；再點(diǎn)“Add”，軟件將加入一個(gè)新的步驟；

9、刪除一個(gè)步驟：點(diǎn)“Step”位置，在點(diǎn)“Delete”，軟件將該步驟刪除；

10、建立梯度模式：點(diǎn)中一個(gè)步驟，再點(diǎn)“Option”鍵；

11、點(diǎn)“VeriFlex step”，出現(xiàn)梯度創(chuàng)建窗口；

輸入6個(gè)梯度溫度，溫度下方的“1－2”是指對(duì)應(yīng)的1、2兩行加熱孔，全部輸好后，點(diǎn)“Done”確定。注意：相鄰的兩個(gè)梯度溫度之差較為大不能*過(guò)5℃！

12、建立漸變模式：

1）點(diǎn)中一個(gè)步驟，再點(diǎn)“Option”鍵；

2）點(diǎn)“Auto Delta”，出現(xiàn)漸變模式創(chuàng)建窗口；

點(diǎn)“Staring Cycle”，輸入起始循環(huán)數(shù)；點(diǎn)“Delta Temperature”，輸入溫度變化值；點(diǎn)“Delta Time”，輸入時(shí)間變化值。漸變模式適用于touchdown PCR，可以提高PCR反應(yīng)的特異性。例：輸入起始循環(huán)數(shù)為2，溫度變化值為＋0.5℃，時(shí)間變化值為＋5s，則表示從第2個(gè)循環(huán)開(kāi)始，每循環(huán)一次升溫0.5℃，時(shí)間增加5s。
13、增加暫停步驟：

1）點(diǎn)中一個(gè)步驟，再點(diǎn)“Option”鍵；

2）點(diǎn)“Pause”；

輸入暫停的起始位置，暫停間隔和暫停時(shí)間，點(diǎn)“Done”確定。上圖表示每隔10個(gè)循環(huán)暫停10s，在10個(gè)循環(huán)的第1個(gè)循環(huán)之前暫停。

14、編輯PCR程序完成后，點(diǎn)“Save”保存;

點(diǎn)“Run Method”，輸入PCR程序名稱；點(diǎn)，選擇保存PCR程序的文件夾（如果要保存在USB文件夾中，需要先插U盤(pán)）。再輸入反應(yīng)體積和熱蓋溫度（這兩項(xiàng)在運(yùn)行程序時(shí)可以修改）。點(diǎn)“SaveδExit”確定；
15、回到PCR程序列表界面，選擇新建的PCR程序；

16、點(diǎn)“Start Run”，出現(xiàn)運(yùn)行參數(shù)設(shè)置窗口；

17、儀器運(yùn)行選中的PCR程序，顯示運(yùn)行監(jiān)視窗口；

18、暫停運(yùn)行：
點(diǎn)“Pause Run”，儀器暫停，出現(xiàn)暫停選項(xiàng)欄；

“Remaining Time”顯示暫停剩余時(shí)間，“Elapse Time”顯示已暫停時(shí)間。
如果需要修改暫停時(shí)間，點(diǎn)，輸入時(shí)間值，點(diǎn)“Done”確定；點(diǎn)“Resume Run”，結(jié)束暫停，繼續(xù)運(yùn)行PCR程序。
19、終止運(yùn)行：點(diǎn)“Stop”可以終止整個(gè)PCR程序；
20、反應(yīng)報(bào)告：
PCR程序結(jié)束后，儀器會(huì)自動(dòng)生成反應(yīng)報(bào)告，顯示當(dāng)次反應(yīng)的各項(xiàng)指數(shù)。該報(bào)告可以保存和打?。?/span>

21、PCR反應(yīng)結(jié)束后，打開(kāi)熱蓋，取出樣品，關(guān)閉儀器電源。并開(kāi)蓋放置，使熱蓋和加熱模塊正常降溫。

以上就是ABI VeritiPCR儀的操作步驟，希望對(duì)各位有所幫助。如果您有任疑問(wèn)，歡迎您咨詢上海巴玖，期待給您一個(gè)滿意的回復(fù)。