酶標(biāo)儀的自檢和校準(zhǔn)從上述所獲的酶標(biāo)儀性能的有關(guān)信息資料,基本上可以說是間接的,有了目標(biāo)以后,如果還想獲得對某一酶標(biāo)儀的感性認(rèn)識,可以對其進(jìn)行自檢,主要有下述幾個方面。
(一)外觀
酶標(biāo)儀上應(yīng)有儀器名稱,型號,編號,生產(chǎn)廠家,出廠日期和電源電壓;各調(diào)節(jié)旋鈕,按鍵和開關(guān)均能正常工作,外表面無明顯機(jī)械損傷;顯示文字應(yīng)清楚完整。
(二)酶標(biāo)儀的穩(wěn)定性(漂移)
選用492nm波長,在吸光度o.0A處,測定標(biāo)稱值為1.0A的光譜中性濾光片(測定操作按儀器說明進(jìn)行),記錄儀器示值或均值,10min后再次記錄儀器示值或均值,前后兩次測定值之差不應(yīng)*過±0.00。
(三)吸光度測定的準(zhǔn)確度
選用405,492和620 nm波長,以空氣為參比,分別測定標(biāo)稱值為0.5和1.0A的光譜中性玻璃濾光片,用測試板代替酶標(biāo)板,按儀器說明連續(xù)測定3次,按下式計算準(zhǔn)確度:AA=1/3(A、+A。+A3)—A:(A:為標(biāo)準(zhǔn)值)。
(四)吸光度測定的重復(fù)性
波長選擇同(3),在酶標(biāo)板排加注空白溶液,第二排加入濃度為200rig/ml的重鉻酸鉀溶液,重復(fù)測定5次。記錄每次測定的第二排吸光度值,取第二排任一孔吸光度值與各次對應(yīng)孔吸光度值。按下式計算重復(fù)性:
(五)酶標(biāo)儀的線性
選用540nm波長,將標(biāo)稱值o.5,1.0A中性濾光片分別放入測試板樣本位置中,以空氣為參比,各重復(fù)測定3次;然后將以上兩片中性濾光片疊加后置于測試板的同一孔位中,重復(fù)測定3次。線性誤差:
式中A1為片中性濾光片吸光度均值,A:為第二片中性濾光片吸光度均值,A1,2為兩片中性濾光片疊加后的吸光度均值。
(六)測定速度的檢定 .
選用492nm波長,放人96孔酶標(biāo)板進(jìn)行測定,用秒表計測儀器打印出全部數(shù)據(jù)的時間。
酶標(biāo)儀除了在選購時,應(yīng)盡可能自檢外,在使用中也應(yīng)定期檢定,以保證酶標(biāo)儀測定的有效性。
附:200ttg/ml重鉻酸鉀溶液的配制
將重鉻酸鉀固體試劑放人稱量瓶中(去蓋)置于烘箱中,在105±5℃下烘2h后,置于干燥器內(nèi)冷卻30min,在分析天平上準(zhǔn)確稱取o.2829g,置于100ml燒杯中,用o.05mol/L稀硫酸溶解后,移入500ml容量瓶中,以少量o.05mol/L稀硫酸洗燒杯3次,洗液并入容量瓶中,用0.05mol/L稀硫酸稀釋至刻度線,搖勻。