PCR儀的使用方法

方法：

1、將DNA加熱（至90~95℃）變性，bai 將雙股的DNA加熱后轉(zhuǎn)為單股DNA以做為復(fù)制的模板。

2、則是令 Primers于一定的溫度下（冷卻至55~60℃）附著于模板DNA兩端。 后在DNA聚合酶e.g. Taq-polymerase 的作用下（加熱至70~75℃）進行引物的延長 Extension of primers及另一股的合成。

標準PCR儀也叫做終點PCR儀，是指目的基因僅經(jīng)過預(yù)變性、變性、退火、延伸階段產(chǎn)生大量的核酸序列的PCR儀，PE-Cetus公司推出的一臺PCR自動化熱循環(huán)儀屬于此種。

根據(jù)PCR退火溫度和擴增條件（細胞內(nèi)/外），標準PCR又可以分為三類：普通PCR、梯度PCR和原位PCR。

PCR是分子生物學(xué)研究極其重要的工具，是一種用于放大擴增特定的DNA段的分子生物學(xué)技術(shù)，基本原理是在試管中模擬細胞內(nèi)的DNA復(fù)制，即人為創(chuàng)造核酸半保留復(fù)制條件，使目的DNA在細胞外完成擴增的過程，它可被看作是生物體外的特殊DNA復(fù)制。

擴展資料

1、普通PCR儀：一般把一次PCR擴增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀，稱之為普通PCR儀。如果要用它做不同的退火溫度則需要多次運行。主要是用作簡單的、對單一退火溫度的目的基因的擴增。主要應(yīng)用于科研、教學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、檢驗、檢疫等。

2、梯度PCR儀：普通PCR儀衍生出的帶梯度PCR功能的基因擴增儀。梯度PCR儀每個孔的溫度可以在范圍內(nèi)按照梯度設(shè)置，一次性PCR擴增可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(通常12種溫度梯度)。由于被擴增的DNA段不同，其退火溫度也不同，通過梯度設(shè)置。

可一次性篩選出的退火溫度。這樣既可節(jié)省試驗時間，提高實驗效率，又能節(jié)約實驗成本。在不設(shè)置梯度的情況下亦可當(dāng)做普通的PCR用。梯度PCR儀多應(yīng)用于科研、教學(xué)機構(gòu)。

3、原位PCR儀：是將PCR技術(shù)的高效擴增與原位雜交的細胞定位結(jié)合起來，用于從細胞內(nèi)靶DNA的定位分析的細胞內(nèi)基因擴增儀，從而在組織細胞原位檢測單拷貝或低拷貝的特定DNA或RNA序列。原位PCR技術(shù)的待檢標本一般先經(jīng)化學(xué)固定，以保持組織細胞的良好形態(tài)結(jié)構(gòu)。

細胞膜和核膜均具有一定的通透性，當(dāng)進行PCR擴增時，各種成分，如引物、DNA聚合酶、核苷酸等均可進進細胞內(nèi)或細胞核內(nèi)，以固定在細胞內(nèi)或細胞核內(nèi)的RNA或DNA為模板，于原位進行擴增。