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酶標(biāo)儀工作原理
工作原理
酶標(biāo)儀實(shí)際上就是一臺(tái)變相的專用光電比色計(jì)或分光光度計(jì)，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)基本相同。圖示是一種單通道自動(dòng)進(jìn)樣的酶標(biāo)儀工作原理圖。光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光，進(jìn)入塑料微孔極中的待測(cè)標(biāo)本。該單色光一部分被標(biāo)本吸收，另一部分則透過標(biāo)本照射到光電檢測(cè)器上，光電檢測(cè)器將這一待測(cè)標(biāo)本不同而強(qiáng)弱不同的光信號(hào)轉(zhuǎn)換成相應(yīng)的電信號(hào)。電信號(hào)經(jīng)前置放大，對(duì)數(shù)放大，模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號(hào)處理后送入微處理器進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和計(jì)算，最后由顯示器和打印機(jī)顯示結(jié)果。
微處理機(jī)還通過控制電路控制機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)X方向和Y方向的運(yùn)動(dòng)來移動(dòng)微孔板，從而實(shí)現(xiàn)自動(dòng)進(jìn)樣檢測(cè)過程。而另一些酶標(biāo)儀則是采用手工移動(dòng)微孔板進(jìn)行檢測(cè)，因此省去了X，Y方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)和控制電路，從而使儀器更小巧，結(jié)構(gòu)也更簡(jiǎn)單。 微孔板是一種經(jīng)事先包理專用于放置待測(cè)樣本的透明塑料板，板上有多排大小均勻一致的小孔，孔內(nèi)都包埋著相應(yīng)的抗原或抗體，微孔板上每個(gè)小孔可盛放零點(diǎn)幾毫升的溶液。其常見規(guī)格有40孔板，55孔板，96孔板等多種，不同的儀器選用不同規(guī)格的孔板，對(duì)其可進(jìn)行一孔一孔地檢測(cè)或一排一排地檢測(cè)。
酶標(biāo)儀所用的單色光既可通過相干濾光片來獲得，也可用分光光度計(jì)相同的單色器來得到。在使用濾光片作濾波裝置時(shí)與普通比色計(jì)一樣，濾光片即可放在微孔板的前面，也可放在微孔板的后面，其效果是相同的。下圖便是目前常用的酶標(biāo)儀光路系統(tǒng)圖。光源燈發(fā)出的光經(jīng)聚光鏡，光欄后到達(dá)反射鏡，經(jīng)反射鏡作90o反射后垂直通過比色溶液，然后再經(jīng)濾光片送到光電管。
從酶標(biāo)儀工作框圖和光路圖上可看出，它和普通的光電比色計(jì)有以下幾點(diǎn)差異:
(1)酶標(biāo)儀通常不用A，有時(shí)也使用光密度OD來表示吸光度。 酶標(biāo)儀可分為單通道和多通道2種類型，單通道又有自動(dòng)和手動(dòng)2種之分。自動(dòng)型的儀器有X，Y方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)機(jī)構(gòu)，可將微孔板L的小孔一個(gè)個(gè)依次送入光束下面測(cè)試，手動(dòng)型則靠手工移動(dòng)微孔板來進(jìn)行測(cè)量。 在單通道酶標(biāo)儀的基礎(chǔ)上又發(fā)展了多通道酶標(biāo)，此類酶標(biāo)僅一般都是自動(dòng)化型的。它沒有多個(gè)光束和多個(gè)光電檢測(cè)器，如 12個(gè)通道的儀器設(shè)有 12條光束或 12個(gè)光源，12個(gè)檢測(cè)器和12個(gè)放大器，在X方向的機(jī)械驅(qū)動(dòng)裝置的作用下，樣品12個(gè)為一排被檢測(cè)。多通道酶標(biāo)儀的檢測(cè)速度快，但其結(jié)構(gòu)較復(fù)雜價(jià)格也較高。
(2)盛裝待測(cè)比色液的容器不再使用比色皿，而是使用塑料微孔板。微孔板常用透明的聚乙烯材料制成，對(duì)抗原抗體有較強(qiáng)的吸附作用，故用它作為固相載體。
(3)由于盛樣本的塑料微孔板是多排多孔的，光線只能垂直穿過，因此酶標(biāo)儀的光來都是垂直通過待測(cè)溶液和微孔板的，光束既可是從上到下，也可以是從下到上穿過比色液