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酶標儀也被稱為微孔板檢測儀,
是生命科學研究實驗室的重要工具。
傳統(tǒng)的酶標儀是指具備吸收光檢測功能的酶聯(lián)免疫檢測儀,后來隨著檢測方式的發(fā)展,在吸收光檢測基礎上增加了熒光和發(fā)光檢測,因此,我們把具有兩種及兩種以上檢測功能的酶標儀稱為多功能酶標儀,也叫做多功能微孔板檢測儀,目前廣泛應用于臨床檢驗、生物學研究、農(nóng)業(yè)科學、食品和環(huán)境科學研究中。
今天小編就以十年技術(shù)支持的經(jīng)驗來簡單粗暴地談一談多功能酶標儀以及它能實現(xiàn)的功能,希望能為研究者在選擇酶標儀的時候提供一定的參考。
多功能酶標儀的應用
多功能酶標儀通常包括紫外-可見吸收光、熒光強度及發(fā)光三種檢測模式,熒光檢測還包括高級熒光應用。因此一臺全面的多功能酶標儀能夠提供的檢測模式可以包括:
1、吸收光檢測(Absorbance):
使用單色器或者濾光片系統(tǒng)來發(fā)射和檢測特定波長,檢測的是物質(zhì)本身,不同的物質(zhì)有不同的吸收光波長,對波長選擇靈活性要求較高。
典型應用:ELISA 以及 DNA/RNA 純度檢測
2、熒光強度(Fluorescence Intensity,F(xiàn)I):
采用特定波長激發(fā)光來激發(fā)樣品孔內(nèi)的熒光標志物,通過檢測器檢測熒光物質(zhì)被激發(fā)產(chǎn)生的發(fā)生光。因為熒光分子被激發(fā)后電子會發(fā)生能量躍遷,當電子回落時產(chǎn)生發(fā)射光,因此發(fā)射光的波長會比激發(fā)光的波長更長(能量更低),比如常用的 GFP 的最佳激發(fā)波長是 488nm ,最佳發(fā)射光檢測波長是 510nm 。
熒光強度還有一個衍生實驗,那就是熒光共振能量轉(zhuǎn)移(Fluorescence Resonance Energy Transfer,F(xiàn)RET),使用兩種熒光分子分別作為供體和受體去標記兩個生物分子,如果兩個生物分子足夠接近,那么供體熒光分子的激發(fā)能誘發(fā)受體熒光分子發(fā)出熒光信號。FRET 通常用來檢測生物大分子相互作用。值得注意的是,選用的供體熒光分子發(fā)射光波長范圍需要與受體熒光分子的激發(fā)光波長重疊。
3、發(fā)光檢測(Luminescence):
包括化學發(fā)光和生物發(fā)光,是樣本孔內(nèi)發(fā)生的化學、生化或者酶反應發(fā)出的光信號。與吸收光和熒光檢測不同的是,發(fā)光檢測不需要激發(fā)光源,這就使得發(fā)光更敏感,更不容易引起背景噪音。
典型應用:ATP 檢測和雙報告基因檢測
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