隔壁的直男師兄今年喜得千金，近總在實驗室詭異地傻笑，問他為何，說是時常想起女兒的可愛模樣。

這種感情，沒養(yǎng)育過孩子的人恐怕理解不了。但生物汪在實驗室養(yǎng)育細(xì)胞，也一樣寄托感情，生怕細(xì)胞被養(yǎng)壞了。一個閃失，就前功盡棄。實驗結(jié)果不可靠，沒有一致性和穩(wěn)定性，還重復(fù)不出來，再濃密的頭發(fā)也經(jīng)不住這樣的考驗。所以，有一個穩(wěn)定、一致的培養(yǎng)環(huán)境，那就很重要了。
 
培養(yǎng)細(xì)胞不可能24小時值守，快快請出四大護(hù)法相助！

1. 大護(hù)法：二甲基亞砜（DMSO）

成功凍存和復(fù)蘇細(xì)胞是細(xì)胞培養(yǎng)研究的常規(guī)操作。細(xì)胞低溫儲藏時，防止冰晶形成是維持細(xì)胞活力的關(guān)鍵。大護(hù)法DMSO作為冷凍保護(hù)玻璃化劑，可以讓細(xì)胞免受冰晶導(dǎo)致的機(jī)械損傷。大護(hù)法法力無邊，能夠用于原代、繼代培養(yǎng)和重組的異倍體和雜交瘤細(xì)胞系、胚胎干細(xì)胞 (ESC) 以及造血干細(xì)胞的凍存。
 
下面為大家解密DMSO這個既熟悉又陌生的細(xì)胞培養(yǎng)大護(hù)法～～

12. DMSO的摩爾濃度是多少？

DMSO的摩爾濃度為14.1 M，依據(jù)是密度1.1 g/mL和分子量78.13 g/ml。

12. DMSO的來源？

過去，DMSO是從樹皮中分離出來的?，F(xiàn)在，它是一種商業(yè)合成的溶劑。

12. 細(xì)胞凍存培養(yǎng)基中應(yīng)使用什么濃度的DMSO？

DMSO通常以1-10％的濃度使用，具體取決于細(xì)胞系。

12. DMSO應(yīng)該是液體，為什么我收到后卻是固體？

DMSO的熔點為16-19℃，室溫過低就凝固。這并不妨礙使用，可以緩慢加熱令其重新液化，不會有任何影響。

12. 哪種類型的過濾器可用于無菌過濾DMSO？

DMSO可以用帶0.2 μm PTFE膜的過濾器進(jìn)行無菌過濾。
 
每個伺候細(xì)胞寶寶的“寶爸寶媽”對棕瓶子白蓋子的DMSO應(yīng)該都不陌生。沒錯！正是Sigma-Aldrich®品牌熱賣的這款DMSO（貨號：D2650）：明星產(chǎn)品，質(zhì)量過硬，口碑積累，適用性廣，久經(jīng)驗證。
 

2. 二護(hù)法：血清

血清里的生長因子能促進(jìn)細(xì)胞的繁殖，附著因子可促進(jìn)細(xì)胞的貼壁，此外礦物質(zhì)、脂類及激素對細(xì)胞也大有裨益。常用的血清有胎牛血清和小牛血清，*澳洲來源的血清品質(zhì)更優(yōu)、更安全。
 
趕快來了解一下保護(hù)細(xì)胞寶寶的二護(hù)法吧～～

12. 如何解凍血清？

血清應(yīng)在2-8°C過夜解凍以避免降解，或者在室溫條件下，定期輕輕搖動使組分重懸。解凍的血清在加入細(xì)胞培養(yǎng)基前應(yīng)該混合均勻。反復(fù)凍存會嚴(yán)重影響血清品質(zhì)，建議將解凍的血清分裝成單次使用量，并凍存于-20°C。如果儲存于2-8°C的環(huán)境中，應(yīng)該在2-4周內(nèi)盡快使用。溫度超過37°C時血清會降解，功能遭到破壞。

12. 如果血清收到時存在部分解凍，還能繼續(xù)使用嗎？

血清是干冰包裝運輸，到達(dá)時應(yīng)該是冷凍狀態(tài)。運輸超期，會部分解凍，但依然可以繼續(xù)使用。

12. 培養(yǎng)基中加入血清和所有補(bǔ)充物后可以儲存多久？

如果正確無菌操作，添加血清的培養(yǎng)基可以在2-8°C長儲存6周。不論儲存時間長短，一旦培養(yǎng)基變渾濁，應(yīng)該使用適當(dāng)?shù)姆椒▉G棄。

12. 為什么血清會出現(xiàn)渾濁或絮狀物質(zhì)？

原因很多，主要有二：

1. 反復(fù)的凍融會使血清脂蛋白發(fā)生變性造成渾濁，所以，一定要分裝哦～～

2. 血清加工中遺留的纖維蛋白原在解凍時會轉(zhuǎn)化成纖維蛋白，過量的纖維蛋白就呈現(xiàn)為絮狀物。不要著急，可以離心移除；不推薦過濾哦，因為容易堵。

12. 什么是γ輻照的血清？

γ輻照的血清通過暴露于放射性60Co產(chǎn)生的25-40 kGy劑量的γ射線來滅活病毒和其他外來微生物(比如支原體)。γ輻照處理不影響血清的理化性質(zhì)或細(xì)胞培養(yǎng)性能。

12. 為什么有些血清是熱滅活的？如何熱滅活？

哺乳動物血清中天然存在的補(bǔ)體蛋白參與細(xì)胞溶解事件、收縮平滑肌、從肥大細(xì)胞和血小板中釋放組胺和激活淋巴細(xì)胞和髓細(xì)胞。熱滅活破壞了血清中補(bǔ)體的活性，因此免疫學(xué)應(yīng)用，培養(yǎng)胚胎干細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時推薦使用。
熱滅活方法是在56°C水浴中處理30分鐘，并每隔大約10分鐘旋轉(zhuǎn)一次瓶子。為了保持準(zhǔn)確，可使用一個類似大小的瓶子作為對照，對照瓶內(nèi)放入同等體積的水，并放置一個溫度計，在溫度到達(dá)56°C時開始計時30分鐘。熱滅活過程必須小心控制，避免血清中支持細(xì)胞和組織繁殖的關(guān)鍵蛋白組分發(fā)生降解。

12. 胎牛血清的顏色和之前使用的批次不同，會影響血清使用效果嗎？

血清的顏色取決于血紅蛋白濃度，顏色差異不影響血清性能。
 
說了這么多，從哪里請到這尊神呢？當(dāng)然選默克啦～～澳洲來源的牛血清，滿足培養(yǎng)細(xì)胞的不同需要！

3. 三護(hù)法：胰蛋白酶

在細(xì)胞培養(yǎng)中，從組織上解離或從貼壁基質(zhì)上分離細(xì)胞的步驟很關(guān)鍵，一般使用胰蛋白酶。胰蛋白酶作用于賴氨酸或精氨酸的C末端，在37°C時具有較高的效率，因此使用期前要預(yù)熱。當(dāng)然，高濃度的胰蛋白酶長期孵育會去除細(xì)胞表面蛋白而損傷細(xì)胞，甚至殺死細(xì)胞。看來，這個護(hù)法的脾氣可不好哦～～

根據(jù)應(yīng)用和細(xì)胞類型的不同，胰蛋白酶的組分和濃度也不同。比如，粘附分子在鈣離子存在時決定細(xì)胞-細(xì)胞和細(xì)胞-基質(zhì)的相互作用，為了削弱折衷聯(lián)系，通常使用含EDTA的胰蛋白酶螯合二價陽離子（Ca, Mg）（點擊這里，了解更多：T4049）。

胰蛋白酶的主要來源是豬的胰臟，產(chǎn)品是凍干粉或溶液。為了避免動物或微生物物質(zhì)，現(xiàn)在也有技術(shù)可以在玉米中重組表達(dá)牛胰蛋白酶，厲害吧？(點擊這里，了解更多：T3449)。

胰蛋白酶的使用濃度也很有講究。對于強(qiáng)貼壁細(xì)胞系，常使用0.25%-2.5%的胰蛋白酶。如果實驗需要細(xì)胞表面蛋白完整，則應(yīng)降低使用濃度（0.05%胰蛋白酶）。
 

4. 四護(hù)法：抗生素

細(xì)菌寶寶的生存環(huán)境這么好，肯定有壞蛋覬覦，這就需要請出四護(hù)法——抗生素。

常見的生物污染由細(xì)菌、真菌和支原體造成，部分由病毒、化學(xué)物和細(xì)胞交叉污染造成。抗生素可以控制細(xì)胞培養(yǎng)中的生物污染。靈活使用抗生素是控制污染的方法，但千萬不要偷懶，還是要注意無菌操作哦～～

青霉素對大多數(shù)革蘭氏陽性菌和少數(shù)革蘭氏陰性菌有效，鏈霉素對革蘭氏陰性菌和少數(shù)革蘭氏陽性菌有效，聯(lián)合使用青霉素和鏈霉素（簡稱雙抗），就能有效控制細(xì)胞培養(yǎng)中大多數(shù)細(xì)菌的污染啦～～

默克旗下有相當(dāng)靠譜的抗生素。Sigma-Aldrich®品牌熱賣的青鏈霉素溶液（貨號為V900929）不僅性能穩(wěn)定，；而且還是即用型經(jīng)典配方（10KU青霉素和10mg鏈霉素/mL），直接以1:100比例添加到培養(yǎng)基中就全搞定！

怎么樣？這四大護(hù)法，是不是各個身手不凡呀！有了他們，細(xì)胞寶寶就可以健康無憂啦～～

友情提醒，11月起我們會推出四大護(hù)法優(yōu)惠組合套裝，敬請留意~

也歡迎大家在留言區(qū)分享自己培養(yǎng)細(xì)胞的心得體會～～