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2012-5-16 閱讀(2800)
用猛烈改變性別如鹽酸胍或硫氰酸胍溶液能迅疾溶解氨基酸， 造成細(xì)胞結(jié)構(gòu)破碎，核蛋白因?yàn)槠涠?jí)結(jié)構(gòu)的毀傷而從核酸上解離下來。RNA酶可耐受多種處置等，因?yàn)檫@個(gè)可聯(lián)用上面所說的試藥，從團(tuán)體中，如富含RNA酶的胰腺中，提出取得完整無缺的RNA。下述實(shí)驗(yàn)手續(xù)系列利用RNA酶制約劑和（或）能迅疾滅活RNA酶的相關(guān)辦法從團(tuán)體或細(xì)胞培育物中離合總RNA、核內(nèi)RNA和胞質(zhì)內(nèi)RNA.
這一從培育的單層哺乳動(dòng)物細(xì)胞中離合RNA的實(shí)驗(yàn)手續(xù)系為Favaloro 等（1980）所紹介手續(xù)的改良。該手續(xù)一樣適合使用于從懸浮培育的哺乳動(dòng)物細(xì)胞中或從便于散布成單個(gè)細(xì)胞的哺乳動(dòng)物團(tuán)體中離合RNA.但不舒服合使用于從固體團(tuán)體中提出取得RNA,由于用這種裂解細(xì)胞的辦法（在SDS存在的條件下用蛋白酶K克化）去克化團(tuán)體速度很慢，造成內(nèi)源性RNA酶在被蛋白酶K克化或被制約劑滅活前有時(shí)候間施展效用。原方案中（Favaloro等。1980）認(rèn)為合適而使用的裂解緩和沖突液包括0.015 （W/V）的Macaloid（硅藻土），用于吸附并滅活RNA酶。盡管現(xiàn)仍有Macaloid賣出NL Chemicals）， 但氧氣釩核糖核苷復(fù)合物和RNA酶的氨基酸制約劑更常用。下述手續(xù)的長(zhǎng)處是速度快，并能同時(shí)處置眾多樣品。
