應(yīng)用簡(jiǎn)介

帕金森氏病（Parkinson’s Disease，PD）是一種會(huì)影響運(yùn)動(dòng)的進(jìn)行性神經(jīng)系統(tǒng)疾病，老年人多見，平均發(fā)病年齡在60歲左右，癥狀會(huì)逐漸出現(xiàn)，有時(shí)始于不易察覺的單手震顫，還常導(dǎo)致僵硬或運(yùn)動(dòng)緩慢。除此之外帕金森患者也表現(xiàn)出了感覺障礙和認(rèn)知功能障礙等非運(yùn)動(dòng)癥狀。

其主要病理變化是黑質(zhì)致密部（SNpc）中多巴胺（DA）能神經(jīng)元進(jìn)行性丟失并伴有紋狀體多巴胺水平的下降、α-突觸核蛋白（α-synuclein, α-Syn））為主要成分的路易小體的形成，致使得腦部指揮肌肉活動(dòng)的能力受到不同程度的限制，大大阻礙了患者的活動(dòng)能力。

導(dǎo)致這一病理變化的確切因素尚不清楚，遺傳因素、環(huán)境因素、年齡老化、氧化應(yīng)激等均可能參與PD多巴胺能神經(jīng)元的變性死亡過程。

PD的發(fā)病機(jī)制和各作用靶點(diǎn)之間的聯(lián)系仍是現(xiàn)今研究的熱點(diǎn)，因此在基礎(chǔ)研究中模型的制備對(duì)PD的研究具有舉足輕重的作用?？偟膩碚f，PD模型主要分為兩類，一是誘發(fā)性動(dòng)物模型，二是基因修飾動(dòng)物模型。

造模方法

在注射當(dāng)天配制好新鮮的MPTP溶液，然后腹腔或皮下注射MPTP。試劑要現(xiàn)用現(xiàn)配。

根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求和目的，可分為快速模型和慢速模型。

快速模型可分為單次注射和多次注射。單次注射的劑為30mg/kg，該模型損傷輕，易恢復(fù)；多次注射的劑量為20mg/kg，每隔2h注射1次，共3-4次，該模型損傷快且嚴(yán)重，DA神經(jīng)元的損傷到死亡可以在3d內(nèi)完成。

慢速模型需多次注射，每天1次，單次注射的劑量為20mg/kg,連續(xù)注射5-7d。該模型的成活率較高，實(shí)驗(yàn)周期較長(zhǎng)。

模型驗(yàn)證：

（1）造模后進(jìn)行行為學(xué)觀察參照Francois的實(shí)驗(yàn)方法(包括行動(dòng)遲緩實(shí)驗(yàn)、抓握實(shí)驗(yàn)和尾強(qiáng)直實(shí)驗(yàn)記錄強(qiáng)直癥狀的變化、震顫實(shí)驗(yàn))記錄帕金森氏病的三大癥狀，觀察到小鼠出現(xiàn)尾巴僵硬豎直，身體出現(xiàn)非自主性震顫，自發(fā)活動(dòng)減少，表明帕金森模型構(gòu)建成功。

（2）離體腦組織中黑質(zhì)、紋狀體免疫組化染色

MPTP在注射后，7d對(duì)小鼠黑質(zhì)致密部（SNpc）和紋狀體（Striatum）免疫染色。結(jié)果所示，在進(jìn)行造模后，小鼠紋狀體（Striatum）末端和黑質(zhì)致密部（SNpc）的酪氨酸羥化酶(TH)陽性細(xì)胞體和纖維所形成的的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)密度顯著降低，且TH陽性細(xì)胞數(shù)量顯著降低，TH陽性纖維密度顯著降低。

MPTP誘導(dǎo)的小鼠帕金森模型由于造模技術(shù)相對(duì)簡(jiǎn)單（只需要腹腔注射）、對(duì)多巴胺神經(jīng)元的殺傷效果穩(wěn)定也得到了廣泛的認(rèn)可。不少關(guān)于多巴胺能神經(jīng)元死亡機(jī)制方面的研究都采用MPTP誘導(dǎo)的小鼠帕金森模型作為實(shí)驗(yàn)范式。

Tips：

（1）MPTP誘導(dǎo)的小鼠帕金森模型對(duì)動(dòng)物的性別、體重、年齡甚至品系來源均非常敏感，因此在挑選動(dòng)物的時(shí)候要十分小心。

• C57BL小鼠對(duì)MPTP最為敏感，而CF-W小鼠、FVB／N小鼠和Balb/C小鼠對(duì)MPTP的敏感性較C57BL小鼠稍差，CF-1和CD-1對(duì)MPTP的敏感性最差。目前較常用的小鼠為C57BL/6小鼠。

• 老齡鼠較青年鼠對(duì)MPTP更為敏感。

（2）在注射前務(wù)必適應(yīng)性飼養(yǎng)1周左右。因?yàn)殚L(zhǎng)距離運(yùn)輸會(huì)改變腦的狀態(tài)，因此需要5-7天時(shí)間來使動(dòng)物恢復(fù)并適應(yīng)環(huán)境。

（3）未被代謝的MPTP將會(huì)隨著動(dòng)物的排泄物被釋放到墊料中，因此在注射之后小鼠需要進(jìn)行嚴(yán)格的隔離飼養(yǎng)。其使用的墊料、飲水必須經(jīng)過無害化處理，然后作為醫(yī)療垃圾廢棄。

（4）MPTPyou劇毒，在稱量溶解和注射時(shí)一定做好個(gè)人的防護(hù)工作。