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液相色譜常見(jiàn)問(wèn)題分析

閱讀:230      發(fā)布時(shí)間:2015-5-4
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早出的峰變形,原因及其解決方法
 
一、酸性或堿性化合物的峰拖尾,原因及其解決方法
 
1、緩沖不合適 
    a、使用濃度50-100mM的緩沖液 b、使用Pka等于流動(dòng)相PH值的緩沖液
 
二、保留時(shí)間波動(dòng),原因及其解決方法
 
1、溫控不當(dāng)
     調(diào)好柱溫
2、流動(dòng)相組分變化
     防止變化(蒸發(fā)、反應(yīng)等)
3、色譜柱沒(méi)有平衡 
     在每一次運(yùn)行之前給予足夠的時(shí)間平衡色譜柱

 
三、基線(xiàn)漂移,原因及其解決方法
 
1、柱溫波動(dòng)。(即使是很小的溫度變化都會(huì)引起基線(xiàn)的波動(dòng)。通常影響示差檢測(cè)器、電導(dǎo)檢測(cè)器、較低靈敏度的紫外檢測(cè)器或其它光電類(lèi)檢測(cè)器。) 
     控制好柱子和流動(dòng)相的溫度,在檢測(cè)器之前使用熱交換器圖
2、流動(dòng)相不均勻。(流動(dòng)相條件變化引起的基線(xiàn)漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。) 
     使用HPLC級(jí)的溶劑,高純度的鹽和添加劑。流動(dòng)相在使用前進(jìn)行脫氣,使用中使用氦氣。
3、流通池被污染或有氣體
     用甲醇或其他強(qiáng)極性溶劑沖洗流通池。如有需要,可以用1N的硝酸。(不要用鹽酸)
4、檢測(cè)器出口阻塞。(高壓造成流通池窗口破裂,產(chǎn)生噪音基線(xiàn)) 
     取出阻塞物或更換管子。參考檢測(cè)器手冊(cè)更換流通池窗。
5、流動(dòng)相配比不當(dāng)或流速變化 
     更改配比或流速。為避免這個(gè)問(wèn)題可定期檢查流動(dòng)相組成及流速。
6、柱平衡慢,特別是流動(dòng)相發(fā)生變化時(shí) 
     用中等強(qiáng)度的溶劑進(jìn)行沖洗,更改流動(dòng)相時(shí),在分析前用10-20倍體積的新流動(dòng)相對(duì)柱子進(jìn)行沖洗。
7、流動(dòng)相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成 
     檢查流動(dòng)相的組成。使用高品質(zhì)的化學(xué)試劑及HPLC級(jí)的溶劑
8、樣品中有強(qiáng)保留的物質(zhì)(高K’值)以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現(xiàn)出一個(gè)逐步升高的基線(xiàn)。 
     使用保護(hù)柱,如有必要,在進(jìn)樣之間或在分析過(guò)程中,定期用強(qiáng)溶劑沖洗柱子。
9、使用循環(huán)溶劑,但檢測(cè)器未調(diào)整。 
     重新設(shè)定基線(xiàn)。當(dāng)檢測(cè)器動(dòng)力學(xué)范圍發(fā)生變化時(shí),使用新的流動(dòng)相。
10、檢測(cè)器沒(méi)有設(shè)定在zui大吸收波長(zhǎng)處。 
       將波長(zhǎng)調(diào)整至zui大吸收波長(zhǎng)處

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