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液相色譜常見問題分析

閱讀:225      發(fā)布時間:2015-5-4
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早出的峰變形,原因及其解決方法
 
一、酸性或堿性化合物的峰拖尾,原因及其解決方法
 
1、緩沖不合適 
    a、使用濃度50-100mM的緩沖液 b、使用Pka等于流動相PH值的緩沖液
 
二、保留時間波動,原因及其解決方法
 
1、溫控不當
     調(diào)好柱溫
2、流動相組分變化
     防止變化(蒸發(fā)、反應(yīng)等)
3、色譜柱沒有平衡 
     在每一次運行之前給予足夠的時間平衡色譜柱

 
三、基線漂移,原因及其解決方法
 
1、柱溫波動。(即使是很小的溫度變化都會引起基線的波動。通常影響示差檢測器、電導(dǎo)檢測器、較低靈敏度的紫外檢測器或其它光電類檢測器。) 
     控制好柱子和流動相的溫度,在檢測器之前使用熱交換器圖
2、流動相不均勻。(流動相條件變化引起的基線漂移大于溫度導(dǎo)致的漂移。) 
     使用HPLC級的溶劑,高純度的鹽和添加劑。流動相在使用前進行脫氣,使用中使用氦氣。
3、流通池被污染或有氣體
     用甲醇或其他強極性溶劑沖洗流通池。如有需要,可以用1N的硝酸。(不要用鹽酸)
4、檢測器出口阻塞。(高壓造成流通池窗口破裂,產(chǎn)生噪音基線) 
     取出阻塞物或更換管子。參考檢測器手冊更換流通池窗。
5、流動相配比不當或流速變化 
     更改配比或流速。為避免這個問題可定期檢查流動相組成及流速。
6、柱平衡慢,特別是流動相發(fā)生變化時 
     用中等強度的溶劑進行沖洗,更改流動相時,在分析前用10-20倍體積的新流動相對柱子進行沖洗。
7、流動相污染、變質(zhì)或由低品質(zhì)溶劑配成 
     檢查流動相的組成。使用高品質(zhì)的化學試劑及HPLC級的溶劑
8、樣品中有強保留的物質(zhì)(高K’值)以饅頭峰樣被洗脫出,從而表現(xiàn)出一個逐步升高的基線。 
     使用保護柱,如有必要,在進樣之間或在分析過程中,定期用強溶劑沖洗柱子。
9、使用循環(huán)溶劑,但檢測器未調(diào)整。 
     重新設(shè)定基線。當檢測器動力學范圍發(fā)生變化時,使用新的流動相。
10、檢測器沒有設(shè)定在zui大吸收波長處。 
       將波長調(diào)整至zui大吸收波長處

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