熒光定量PCR因操作方便、運行速度快、實驗結(jié)果準(zhǔn)確,受到越來越多的分子生物學(xué)研究者青睞。想要選擇一款適合自己需求的熒光定量PCR儀時我們該關(guān)注些什么呢?
1.儀器的檢測通量
在購買定量PCR儀的時候要根據(jù)實驗實的需要來選擇不同通量的儀器。目前市面上的熒光定量PCR的檢測通量小到16個多到384個。如果進(jìn)行一般的基因表達(dá)研究或病原體檢測,實在不必購買昂貴的儀器,96孔的通量足夠用;需要尋找要新藥靶點和疾病標(biāo)記的實驗室可以考慮購買384孔板的儀器。假如經(jīng)費有限無法購買384孔板儀器的實驗室,可以考慮購買運行速度快(帶有FAST模塊)的96孔板熒光定量PCR儀。有了高通量的儀器,你會發(fā)現(xiàn)樣品的制備和小體系、多樣本的PCR體系構(gòu)建成為限制實驗速度和結(jié)果的頸瓶。所以高通量的實驗室往往需要進(jìn)一步的自動化儀器,只要“按一下鈕”,儀器就會自動處理樣品、純化核酸和制備PCR模板。
2.多重擴(kuò)增的能力
多重擴(kuò)增越來越熱。實時定量PCR儀也不能幸免。定量PCR儀擁有多個檢測通道,因而儀器就可以檢測同一個樣品槽里多個模板的擴(kuò)增過程。不過多重擴(kuò)增并非人人適用,因為它使實驗復(fù)雜化了。
3.軟件
當(dāng)你準(zhǔn)備選擇一臺定量PCR儀,你必須要檢測附帶的軟件。使用方便嗎,是否可以進(jìn)行你所需要的分析,輸出格式有幾種。不過,你需要留意,太容易使用的軟件是不是功能比較簡單而無法進(jìn)行復(fù)雜計算,以前的軟件還需要你做進(jìn)一步分析,新的軟件已經(jīng)可以處理一切了。除了基本功能,部分軟件還可以有更多的功能,比如引物和探針設(shè)計、多重分析設(shè)計、背景校正、數(shù)據(jù)歸一化等等。
4.靈活性
大規(guī)模繁忙的實驗室設(shè)備先進(jìn)固然令人羨慕,常規(guī)的實驗室同樣可以有精彩的選擇。現(xiàn)在的供應(yīng)商都擁有眾多的技術(shù)專家,不單了解你的目前需要,還非常周到地為你考慮了以后可能的需求變化,比如提供多種可升級配件和模塊。當(dāng)實驗室需要較大規(guī)模實驗時,可以非常經(jīng)濟(jì)地升級,從1個增加到6個基本模塊,也就是96樣品孔。雖然不能用96孔板,但是當(dāng)一個學(xué)生開始小量實驗,其他人還可以隨時插進(jìn)去開始自己的獨立實驗,而且互不干擾,就是增加了靈活性。對于剛開始只做少量實驗而且預(yù)算較緊張的實驗室來說是非常靈活的選擇。
5.不確定性
盡管軟件可以做部分修正,購買一臺系統(tǒng)誤差較少的儀器,無需那么多計算修正總比靠計算修正好。要特別注意儀器樣品孔之間的差異性。除了樣品孔之間的溫度差異,還有樣品孔和檢測探頭之間光程距離、負(fù)責(zé)收發(fā)和傳遞信號的光纖長度的微小差別、透鏡和樣品孔間的距離和角度的微小差別、甚至樣品槽對信號傳遞的影響。很多時候,不同樣品孔之間會有不同的結(jié)果。
6.試劑盒的選擇
盡管銷售人員會吹噓有出色質(zhì)量控制的試劑盒和解決方案就會得到一至的結(jié)果,但購買現(xiàn)成的試劑盒并不是解決差異性的辦法。認(rèn)真的評估實驗和分析實驗才是解決之道。
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