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Laminin-511 是基底膜的主要成分,可作為多能干細胞(ES/iPS 細胞)的支架。
作為基底膜的一部分,層粘連蛋白 511 (800 kDa) 與細胞表面的整合素結(jié)合。
Laminin-511 是一種非常大的蛋白質(zhì) (800 kDa),由三條鏈(α-、β-和 γ- 鏈)組成,并形成超分子聚集體。很難作為重組蛋白生產(chǎn)。
當我們將 Laminin-511 片段化并在細胞表面尋找與整合素結(jié)合的最小成分時,我們確定了稱為 Laminin-511 E8 片段 (150 kDa) 的成分。我們決定將該成分作為重組蛋白生產(chǎn)。
與“Laminin-511 (Intact)"相比,人類 iPS 細胞對 Laminin-511 E8 片段的粘附更強。
比較了層粘連蛋白 511 E8 片段和其他底物的細胞附著。
吸光度 (OD570) 表示相對于對 Matrigel 的最大影響值進行歸一化的附著細胞的相對數(shù)量,該值被任意設(shè)置為 1。
該結(jié)果證實層粘連蛋白-511 E8 片段強烈地粘附于細胞。
分散的人單個 ES 細胞迅速粘附在 Laminin-511 E8 片段上并立即增殖。
我們在層粘連蛋白 511 E8 片段和其他細胞培養(yǎng)基質(zhì)上傳代人 ES 細胞。
傳代時單個人 ES 細胞集落證實 Laminin-511 E8 片段迅速粘附在細胞上并增殖。
使用傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法,如果 ES/iPS 細胞分散成單個細胞,細胞就會死亡。
因此,在傳代時,一定程度上需要維持一個細胞集落。
使用 Laminin-511 E8 片段作為細胞培養(yǎng)基質(zhì),甚至可以維持和培養(yǎng)單個 ES/iPS。
-> 減少學(xué)習(xí)細胞培養(yǎng)方法所需的時間。
-> 細胞培養(yǎng)的延伸效率顯著提高。
*5天
*菌落傳代方法
傳統(tǒng)的培養(yǎng)方法(菌落傳代)傳代時的延伸效率為1:4,而使用Laminin-511 E8片段作為細胞培養(yǎng)基質(zhì)時,延伸率為1:100。
我們比較了傳統(tǒng)方法(菌落法)培養(yǎng)30天的ES/iPS細胞數(shù)量和使用Laminin-511 E8片段作為細胞培養(yǎng)基質(zhì)培養(yǎng)的ES/iPS細胞數(shù)量。圖表的橫軸表示培養(yǎng)天數(shù),縱軸表示細胞數(shù)。
結(jié)果證實,與傳統(tǒng)方法(菌落法)相比,使用Laminin-511 E8片段的細胞數(shù)增加了200或更多。
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