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cube-biotech PureCube 疏水相互作用瓊脂糖說明書

時(shí)間:2022-9-14閱讀:778
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cube-biotech PureCube 疏水相互作用瓊脂糖說明書

疏水相互作用

疏水相互作用色譜法是一種成熟的方法,可根據(jù)蛋白質(zhì)的表面電荷和疏水性純化蛋白質(zhì)。提供疏水表面的色譜基質(zhì)用于分離。這種方法不需要將任何親和標(biāo)簽融合到要純化的蛋白質(zhì)上。因此它適用于天然和重組蛋白的純化。我們提供疏水相互作用基質(zhì),其表面具有苯基、辛基或丁基。對(duì)于一種新型蛋白質(zhì),強(qiáng)烈建議比較不同的基質(zhì),并且可以使用含有少量每種基質(zhì)的 HIC 篩選集。我們的 PureCube 瓊脂糖基于 BioWorks Workbeads,提供高的結(jié)合能力和可重復(fù)的結(jié)果,尤其是在 FPLC 色譜應(yīng)用中。

PureCube 疏水相互作用瓊脂糖提供:

  • 增加配體密度以獲得高蛋白質(zhì)產(chǎn)量,特別是對(duì)于較小的蛋白質(zhì)

  • 不同基質(zhì)的選擇:苯基、辛基和丁基瓊脂糖

  • 由直徑為 40 µm 的交聯(lián)瓊脂糖制成的均質(zhì)基礎(chǔ)基質(zhì)

  • 離子交換瓊脂糖純化后第二步的理想選擇

我們還在一個(gè)實(shí)用的入門套件中提供所有三種 HIC 瓊脂糖樹脂,用于測試目的。

 

疏水相互作用 (HIC) 如何用于蛋白質(zhì)純化?
HIC 分離基于蛋白質(zhì)的疏水區(qū)域與表面上含有疏水基團(tuán)(例如丁基、辛基或苯基)的色譜介質(zhì)的相互作用。高離子強(qiáng)度增強(qiáng)了這種相互作用,使 HIC 成為硫酸銨沉淀后或在高鹽緩沖液中從離子交換介質(zhì)洗脫后的理想純化步驟。
捆綁
蛋白質(zhì)可能在非常高的鹽濃度下沉淀,因此建議在小規(guī)模實(shí)驗(yàn)中測試感興趣的蛋白質(zhì)是否以結(jié)合所需的鹽濃度保持在溶液中。
洗脫
結(jié)合的蛋白質(zhì)可以用低鹽緩沖液洗脫。強(qiáng)烈建議使用鹽梯度(例如硫酸銨或氯化鈉)進(jìn)行洗脫,以確保蛋白質(zhì)保持在穩(wěn)定所需的*佳鹽濃度。
我的蛋白質(zhì)用哪種基質(zhì)?
與等電點(diǎn)測定相比,很難預(yù)測蛋白質(zhì)的整體疏水性,因?yàn)橹挥械鞍踪|(zhì)表面上的孤立斑塊可能是疏水性的,但足以與 HIC 基質(zhì)相互作用。因此,建議測試不同的樹脂是否適合以使蛋白質(zhì)保持在溶液中的濃度結(jié)合感興趣的蛋白質(zhì),以適合蛋白質(zhì)穩(wěn)定性和活性的鹽濃度將其洗脫,同時(shí)將其與污染蛋白質(zhì)分離。PureCube HIC 入門套件是為輕松比較三種不同材料而開發(fā)的。

 

圖 1:疏水相互作用基質(zhì)中使用的官能團(tuán)的化學(xué)結(jié)構(gòu)。
圖 2:在 PureCube Phenyl Agarose 和競爭產(chǎn)品上純化兩種測試蛋白。對(duì)于較大的測試蛋白質(zhì)(BSA,66 kDa),兩種 HIC 樹脂均獲得了約 25 mg/mL 的樹脂產(chǎn)量。對(duì)于較小的測試蛋白(14 kDa),PureCube 基質(zhì)的產(chǎn)量大約高出 4 倍(PureCube:45 mg/mL,競爭對(duì)手 G:11 mg/mL)。純化分批進(jìn)行,在 1.5 M 硫酸銨、100 mM NaH2PO4、pH 7.0 下結(jié)合和洗滌,并在 100 mM NaH2PO4、pH 7.0 下洗脫。E1、E2:洗脫級(jí)分 1 和 2。

特征

此列表包括適用于所有 HIC 瓊脂糖產(chǎn)品的功能。如果在特定功能中存在差異,則會(huì)提及。
用法 通過疏水相互作用與蛋白質(zhì)結(jié)合
特異性 蛋白質(zhì)中的疏水殘基
流量 高達(dá) 6 毫升/分鐘
灌裝量 作為 50% 的懸浮液交付
pH 穩(wěn)定性 酸堿度 2-13
化學(xué)基團(tuán)密度 40 微摩爾/毫升
結(jié)合能力 BSA 25 mg/mL(辛基為 10mg/mL);溶菌 45 mg/mL(辛基為 20 mg/mL)。
珠粒大小 40微米
珠配體 苯基、辛基或丁基
所需設(shè)備  
  • 裂解緩沖液

  • 洗滌緩沖液

  • 洗脫緩沖液

  • 用于 50 mL 管 (min10,000 xg) 和 2 mL 管的冷凍離心機(jī)

  • 冷凍超高速或超速離心機(jī),容量可達(dá) 100.000 xg

  • 端對(duì)端旋轉(zhuǎn)器

  • 2 mL 微量離心管

  • 15 mL 聚丙烯管、50 mL 聚丙烯管和 50 mL 聚碳酸酯高速離心管(用于超速離心機(jī))

  • 微量移液器和微量移液吸頭

  • 帶蓋底部出口的一次性重力流柱,2 mL

  • ?酸堿度計(jì)

  • 端對(duì)端搖床

  • SDS-PAGE 緩沖液、試劑和設(shè)備 可選:Western Blot 試劑和設(shè)備

 

 

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