ALSTEM是一家位于灣區(qū)的早期生物技術(shù)公司，擁有快速擴(kuò)展的產(chǎn)品和服務(wù)組合，為生物制藥和學(xué)術(shù)機(jī)構(gòu)提供服務(wù)。受到加利福尼亞干細(xì)胞研究承諾的啟發(fā)，ALSTEM于2012年由具有iPS細(xì)胞重編程和基因組編輯技術(shù)專業(yè)知識的科學(xué)家創(chuàng)立。

NanoFect轉(zhuǎn)染試劑：＃NF100

產(chǎn)品描述

NanoFect Transfection Reagent是一種*的聚合物混合物，與的脂質(zhì)轉(zhuǎn)染試劑盒相比，可以更低的成本向細(xì)胞提供更多的DNA和siRNA。NanoFect™是一種功能強(qiáng)大，適用范圍廣泛的轉(zhuǎn)染試劑，可有效，可重復(fù)轉(zhuǎn)染。

• 概觀
• 程序

NanoFect試劑在DNA和RNA存在下自組裝納米顆粒。這些復(fù)合物很容易被靶細(xì)胞吸收，從而有效地進(jìn)行基因遞送。由于NanoFect在抗生素和血清存在下起作用，因此無需更換培養(yǎng)基。這種易于使用的方案，在直接添加到靶細(xì)胞之前快速一步孵育15分鐘，使NanoFect非常適合高通量轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。

為了高轉(zhuǎn)染效率和低毒性，以高密度轉(zhuǎn)染細(xì)胞。建議使用50-80％的融合度。

細(xì)胞應(yīng)在轉(zhuǎn)染前18至24小時(shí)接種，以使細(xì)胞密度在轉(zhuǎn)染時(shí)達(dá)到50~80％匯合。在轉(zhuǎn)染前2小時(shí)，向每個孔中新鮮加入含有血清和抗生素的*培養(yǎng)基。

以下方案用于在24孔板中轉(zhuǎn)染，參見表1用于其他培養(yǎng)形式的轉(zhuǎn)染。

1.對于每個孔，在轉(zhuǎn)染前2小時(shí)新鮮加入0.5ml正常生長培養(yǎng)基（抗生素不影響結(jié)果）。

2.對于每個孔，在50μl不含血清的DMEM中稀釋0.5μgDNA，并輕輕混合。

3.將1μlNanoFect試劑加入另一個含有50μl不含血清的DMEM的試管中，輕輕混勻。

4.將NanoFect / DMEM添加到DNA / DMEM溶液中。通過渦旋混合5-10秒。

5.在室溫下孵育約15分鐘，以使NanoFect / DNA復(fù)合物自組裝。

6.將100μlNanoFect/ DNA混合物逐滴添加到每個孔中的細(xì)胞中，并通過輕輕旋轉(zhuǎn)平板使其均質(zhì)化。

7.將平板放回細(xì)胞培養(yǎng)箱中。

8.轉(zhuǎn)染后24至48小時(shí)檢查轉(zhuǎn)染效率。

表1.不同文化的推薦量

注意：對于不同的細(xì)胞類型，NanoFect（μL）：DNA（μg）的適合比例約為3：1。我們建議將NanoFect（μL）：DNA（μg）比例為2：1作為起點(diǎn)，通?？梢蕴峁┝钊藵M意的轉(zhuǎn)染效率和不可見的細(xì)胞毒性，但NanoFect的量可以從2到4μl/μgDNA調(diào)整，具體取決于要轉(zhuǎn)染的細(xì)胞系。為確保NanoFect / DNA復(fù)合物顆粒的宜尺寸，我們建議使用含有高葡萄糖的無血清DMEM稀釋DNA和NanoFect Reagent。

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