雞禽流感病毒抗體檢測試劑盒(檢血清)
產(chǎn)品介紹
雞禽流感病毒抗體檢測試劑盒檢測雞血清中的禽流感病毒抗體,用于評估養(yǎng)雞場雞禽流感疫苗免疫狀況及感染雞的血清學(xué)輔助診斷。
本試劑盒采用間接ELISA法,在酶標板微孔上預(yù)包被禽流感抗原。在試驗中,加入稀釋后的待檢血清,經(jīng)過溫育后,若樣品中含有禽流感特異性抗體,則與包被板上的抗原結(jié)合,經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其他成分后;加入酶標二抗,與檢測板上的抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物;在微孔中加入TMB底物液,經(jīng)酶催化形成藍色產(chǎn)物,加入終止液終止反應(yīng)后,用酶標儀450nm波長測定反應(yīng)孔中的吸光度A值。
組份
1 | 抗原預(yù)包被板條 | 1塊 | 7 | 終止液 | 6ml |
2 | 酶結(jié)合物 | 12ml |
| 陰性對照 | 800µl |
3 | 10倍濃縮洗滌液 | 50ml |
| 陽性對照 | 800µl |
4 | 底物A液 | 6ml |
| 血清稀釋 | 1塊 |
5 | 底物B液 | 6ml |
| 封板膜 | 2張 |
6 | 樣本稀釋液 | 50ml |
| 說明書 | 1份 |
需自備的設(shè)備及試劑
1. 微量移液器: 0.5µl--10µl、10µl--100µl、100µl--1000µl。
2. 一次性移液器吸頭。
3. 量筒:500ml。
4. 96孔板酶標儀。
5. 蒸餾水或去離子水。
6. 洗瓶或洗板機。
樣品制備
取動物全血,按常規(guī)方法制備血清,要求血清清亮,無溶血。
洗滌液的準備
濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫,如有鹽結(jié)晶,搖動使結(jié)晶的鹽溶解,然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。
樣品的稀釋
在血清稀釋板中按1:101的體積比稀釋待檢血清(例如:200μl樣品稀釋液中加2μl待檢血清)。
注意:陰性和陽性對照不用稀釋。取每個樣品后都要更換吸頭,準確記錄每個樣品在板上的位置。每個樣品在加入到包被板微孔前應(yīng)充分混勻。
注意事項
1. 試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫,使用前應(yīng)搖勻,使用后放回2~8℃。
2. 不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用,使用試劑時應(yīng)防止試劑污染。
3. 底物和終止液對皮膚和眼可能有刺激性,使用時應(yīng)該注意防護。
4. TMB(底物B液)不要暴露于強光和避免接觸氧化劑。
5. 檢測板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中,并盡快置于2~8℃)。
6. 所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。
7. 嚴格遵守操作說明可以獲得h的結(jié)果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須精q。
8. 血清稀釋板為一次性用品,不得重復(fù)使用;血清稀釋板的大容量為300μl/孔。
操作步驟
1. 取預(yù)包被的檢測板(根據(jù)樣品多少,可拆開分次使用),將稀釋好的待檢血清取100μl加入到檢測板孔中。同時設(shè)陰性、陽性及空白對照各1孔,取陰性及陽性對照各100μl
分別加入反應(yīng)孔中,空白對照僅加入100μl樣本稀釋液。輕輕振勻孔中樣品(勿溢出)。
2. 蓋上封板膜,置37℃溫育30分鐘。
3. 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,用洗滌液洗3次。每次用洗滌液注滿板孔(約350μl),靜置1分鐘后甩掉。洗滌3次后在干凈吸水紙上拍干。
4. 每孔加酶結(jié)合物100μl,蓋上封板膜,置37℃溫育30分鐘。
5. 小心揭開封板膜,甩掉板孔中的溶液,洗滌3次, 方法同2。切記后在干凈吸水紙上拍干。
6. 每孔先加底物A液50µl、再加底物B液50µl,混勻、蓋上封板膜37℃閉光顯色10分鐘。
7. 每孔加終止液50μl,使反應(yīng)終止,10分鐘內(nèi)測定結(jié)果。
結(jié)果判定
以空白對照調(diào)零用酶標儀于450nm(630nm作參比波長)讀取吸光度A值。試驗成立的條件是陽性對照孔A450值大于或等于0.5,陰性對照孔A450值必須小于0.2。如果試驗無效,試驗中的操作值得懷疑,試驗應(yīng)重做,并仔細檢察各組分。
樣品A450值大于0.25+陰性對照孔均值,判為陽性;樣品A450值小于0.25+陰性對照孔均值,判為陰性;如陰性對照孔均值小于0.05按0.05計算。
有效期
貯存方法: 2 - 8ºC下貯存。
有效期: 12個月。
H5亞型禽流感病毒抗原快速檢測卡(檢泄殖腔拭子/糞便,20條/盒)