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PCR儀的分類及各自的介紹

閱讀:2046        發(fā)布時間:2016-10-9
PCR,中文譯為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),它是一種DNA的快速擴(kuò)增技術(shù),其擴(kuò)增效率之高就象核裂變的“鏈?zhǔn)椒磻?yīng)”一樣。PCR技術(shù)通過兩個短的稱為引物的DNA小片段和一種耐熱的酶的作用,可以在3個小時內(nèi)把特定的DNA量提高1000萬倍。

 

PCR儀也叫基因擴(kuò)增儀,它是利用PCR技術(shù)對特定基因做試管內(nèi)的大量合成,也就是利用DNA聚合酶進(jìn)行專一性的連鎖復(fù)制?;驍U(kuò)增儀一般分為四種:普通基礎(chǔ)PCR儀,梯度PCR儀,實時熒光定量PCR儀,原位PCR儀。

 

(1)普通基礎(chǔ)PCR儀 

一次PCR擴(kuò)增只能運行一個特定退火溫度的PCR儀,叫做普通基礎(chǔ)PCR儀。普通基礎(chǔ)PCR儀由主機(jī),加熱模塊,PCR管,熱蓋,控制軟件組成。

 

基礎(chǔ)PCR儀主要適用于分子生物學(xué)、醫(yī)學(xué)臨床診斷、食品工業(yè)、司法科學(xué)、生物技術(shù)、環(huán)境科學(xué)、微生物學(xué)、遺傳學(xué)、基因芯片、基因檢測、基因克隆、基因表達(dá)等領(lǐng)域以聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Picymerase Chain Reaction , PCR)為特征的、以檢測DNA/RNA為目的的各種及基因分析。

 

(2)梯度PCR儀

在一次性PCR擴(kuò)增中可以設(shè)置一系列不同的退火溫度條件(溫度梯度),通常12種溫度梯度,這樣的儀器就叫梯度PCR儀。因為被擴(kuò)增的不同DNA片段,其適退火溫度不同,通過設(shè)置一系列的梯度退火溫度進(jìn)行擴(kuò)增,從而一次性PCR擴(kuò)增,就可以篩選出擴(kuò)增量高的適退火溫度,進(jìn)行有效的擴(kuò)增。主要用于研究未知DNA退火溫度的擴(kuò)增,這樣節(jié)約成本的同時也節(jié)約了時間。

 

梯度PCR儀,在不設(shè)置梯度的情況下也可以做普通PCR擴(kuò)增。和普通基礎(chǔ)PCR儀一樣,梯度PCR儀可用于醫(yī)學(xué),食品,司法,科研,教學(xué)等領(lǐng)域。

 

(3)實時熒光定量PCR儀

在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因,利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法,叫做實時熒光定量PCR技術(shù),也稱real-time Q-PCR。

 

其PCR擴(kuò)增原理和普通PCR儀擴(kuò)增原理相同,只是PCR擴(kuò)增時加入的引物是利用同位素、熒光素等進(jìn)行標(biāo)記,使用引物和熒光探針同時與模板特異性結(jié)合擴(kuò)增。擴(kuò)增的結(jié)果通過熒光信號采集系統(tǒng)實時采集信號連接輸送到計算機(jī)分析處理系統(tǒng)得出量化的實時結(jié)果輸出。

 

熒光定量PCR儀是在普通PCR儀的基礎(chǔ)上增加一個熒光信號采集系統(tǒng)和計算機(jī)分析處理系統(tǒng),與普通PCR儀,梯度PCR儀相比,無需做電泳分析,實驗一步檢測完成。熒光檢測系統(tǒng)主要包括激發(fā)光源和檢測器。激發(fā)光源有鹵鎢燈光源、氬離子激光器、發(fā)光二極管LED光源,前者可配多色濾光鏡實現(xiàn)不同激發(fā)波長,而單色發(fā)光二極管LED價格低、能耗少、壽命長,不過因為是單色,需要不同的LED才能更好地實現(xiàn)不同激發(fā)波長。監(jiān)測系統(tǒng)有超低溫CCD成像系統(tǒng)和PMT光電倍增管,前者可以一次對多點成像,后者靈敏度高但一次只能掃描一個樣品,需要通過逐個掃描實現(xiàn)多樣品檢測,對于大量樣品來說需要較長的時間。

 

熒光定量PCR儀有單通道,雙通道,和多通道。當(dāng)只用一種熒光探針標(biāo)記的時候,選用單通道,有多熒光標(biāo)記的時候用多通道。單通道也可以檢測多熒光的標(biāo)記的目的基因表達(dá)產(chǎn)物,因為一次只能檢測一種目的基因的擴(kuò)增量,需多次擴(kuò)增才能檢測完不同的目的基因片段的量。

 

(4)原位PCR儀

原位PCR儀是在組織細(xì)胞里進(jìn)行PCR反應(yīng)的一種基因擴(kuò)增儀。它結(jié)合了具有細(xì)胞定位能力的原位雜交和高度特異敏感的PCR技術(shù)的優(yōu)點,可以對細(xì)胞或組織內(nèi)的DNA片段進(jìn)行原位擴(kuò)增分析—即定位分析。原位PCR儀由主機(jī),加熱模塊,玻片,熱蓋,控制軟件組成。

 

普通的PCR雖然能擴(kuò)增包括福爾馬林固定、石蠟包埋組織的各種標(biāo)本的DNA,但擴(kuò)增的DNA或RNA產(chǎn)物不能在組織細(xì)胞中定位,因而不能直接與特定的組織細(xì)胞特征相,這是該技術(shù)一個局限性。原位雜交雖具有良好的定位能力,但由于其敏感性問題,尤其是在石蠟切片中,尚不能檢測出低含量的DNA或RNA序列。而原位PCR可使擴(kuò)增的特定DNA片段在分離細(xì)胞和組織切片中定位,從而彌補(bǔ)了PCR和原位雜交的不足。

 

原位PCR反應(yīng)是在載玻片的平面上進(jìn)行,保持水平可以使反應(yīng)各組分均勻地分布在組織切片上,所以須在原位PCR儀上進(jìn)行,該儀器不但可以使載玻片保持水平,而且還可以給載玻片進(jìn)行均勻地加熱,保證擴(kuò)增反應(yīng)的順利進(jìn)行。

 

原位PCR儀是細(xì)胞學(xué)科研與臨床診斷領(lǐng)域里的一項有較大潛力的新技術(shù),目前應(yīng)用還不太廣泛。原位PCR既能分辨鑒定帶有靶序列的細(xì)胞,又能標(biāo)出靶序列在細(xì)胞內(nèi)的位置,于分子和細(xì)胞水平上研究疾病的發(fā)病機(jī)理和臨床過程及病理的轉(zhuǎn)變有重大的實用價值。

 

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