ELISA實(shí)驗(yàn)方法之競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)抗原及...

 

    上次給大家介紹的雙抗體夾心法不知道大家還有印象嗎？本公司介紹它的特點(diǎn)及說(shuō)明.

    競(jìng)爭(zhēng)法檢測(cè)抗原

    當(dāng)小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的抗體結(jié)合位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定，可以采用競(jìng)爭(zhēng)法模式。經(jīng)洗滌后分成兩組：一組加酶標(biāo)記抗原和被測(cè)抗原的混合液，而另一組只加酶標(biāo)記抗原，再經(jīng)孵育洗滌后加底物顯色，這兩組底物降解量之差，即為所要測(cè)定的未知抗原的量。小分子激素、藥物等ELISA測(cè)定多用此法。

    競(jìng)爭(zhēng)法的簡(jiǎn)要操作步驟：

    1）先加入抗體，使抗體固定結(jié)合于載體表面；

    2）加入梯度濃度比例的待測(cè)樣品與酶標(biāo)抗原混合物,同時(shí)做只加酶標(biāo)抗原的對(duì)照組；

    3）加入酶促反應(yīng)底物，發(fā)生顯色反應(yīng)，對(duì)比實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組的顯色差異，計(jì)算未知抗原的量。

    雙抗原夾心法檢測(cè)抗體

    雙抗原夾心法的反應(yīng)模式與雙抗體夾心法類似。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物，以檢測(cè)相應(yīng)的抗體。與間接法測(cè)抗體的不同之處為以酶標(biāo)抗原代替酶標(biāo)抗抗體。此法中受檢標(biāo)本不需稀釋，可直接用于測(cè)定，因此其敏感度相對(duì)高于間接法。乙肝標(biāo)志物中抗HBs的檢測(cè)常采用本法。本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備，應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同，尋找合適的標(biāo)記方法。

    雙抗原夾心法的簡(jiǎn)要操作步驟為：

    1）先加入抗原，使抗體固定結(jié)合于載體表面；

    2）再加樣品，使目標(biāo)檢測(cè)抗體形成抗原-抗體復(fù)合物；

    3）加酶標(biāo)抗原；

    4）加入酶促反應(yīng)底物，發(fā)生顯色反應(yīng)，顯色的深淺與待測(cè)抗體的量成正比。