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小鼠ELISA試劑盒八大保存方法的各種事項(xiàng)
閱讀:1437 發(fā)布時間:2020-9-9注意事項(xiàng):
1.一般供給的小鼠ELISA試劑盒為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)小鼠ELISA試劑盒有懸浮物,則可將小鼠ELISA試劑盒加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接過濾血清。
2.需要長期保存的小鼠ELISA試劑盒有必要儲存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時刻切勿超過1個月。由于小鼠ELISA試劑盒結(jié)冰時體積會增加約10%,因而,小鼠ELISA試劑盒在凍入低溫冰箱前,有必要預(yù)留一定體積空間,不然易發(fā)作污染或玻璃瓶凍裂。
3.瓶裝小鼠ELISA試劑盒凍結(jié)需采用逐漸凍結(jié)法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的小鼠ELISA試劑盒放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷悄悄搖晃均勻(小心勿形成氣泡),使溫度與成分均一,削減沉積的發(fā)作。切勿直接將小鼠ELISA試劑盒從-20℃進(jìn)入37℃凍結(jié),這樣因溫度改變太大,容易形成蛋白質(zhì)凝聚而出現(xiàn)沉積。
4.熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*凍結(jié)的小鼠ELISA試劑盒。加熱過程中須規(guī)矩?fù)u晃均勻。此熱處理的意圖是使小鼠ELISA試劑盒中的補(bǔ)體成分(complement)滅活。除非有必要,一般不建議作此熱處理,因?yàn)闊崽幚頃纬裳宄练e物顯著增多,而且還會影響小鼠ELISA試劑盒的質(zhì)量。補(bǔ)體參與反響有: 滑潤肌細(xì)胞收縮, 肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強(qiáng)吞噬作用, 促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞發(fā)作化學(xué)趨化和活化。
5.切勿將小鼠ELISA試劑盒在37℃放置太久,不然血清會變得污濁,同時小鼠ELISA試劑盒中的有效成分會破會而影響小鼠ELISA試劑盒質(zhì)量。
6.血清中的沉積物
處理與保存方法:
1. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:適用于小鼠ELISA試劑盒檢測體外培養(yǎng)的細(xì)胞分泌性成份。用無菌管收集細(xì)胞上清液,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
2. 細(xì)胞:用PBS反復(fù)洗滌細(xì)胞3次,調(diào)整細(xì)胞濃度達(dá)到104-106/ml 左右,通過反復(fù)凍融,使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份,或者細(xì)胞超聲粉碎,離心取上清液檢測。
3. 血清:在室溫下,血液自然凝固,以1000×g離心15分鐘,取上清待測。
4. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA 或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合后靜置10-20 分鐘后,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
5. 體液:包括胸腹水、腦脊液,分泌物等。使用不含熱原和內(nèi)毒素的離心管收集,以1000×g離心15分鐘,收集上清。
6. 組織標(biāo)本:切取組織標(biāo)本,稱取重量0.5mg,加入500ul 的PBS,用手工或勻漿器,或超聲破碎儀將標(biāo)本勻漿,以2000-3000rmp離心20 分鐘,收集上清進(jìn)行檢測。
7. 樣品中不能含有NaN3,因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
8. 保存:如果樣品小鼠ELISA試劑盒不能立即檢測,應(yīng)將其分裝,-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。血液標(biāo)本盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中含大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。