技術(shù)文章
熒光-PCR法原理與技術(shù)原理
閱讀:2223 發(fā)布時間:2021-2-25熒光-PCR法原理:
所謂實時熒光定量PCR技術(shù),是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。
熒光-PCR法技術(shù)原理:
將標(biāo)記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后,完成高溫變性,低溫復(fù)性,適溫延伸的熱循環(huán),并遵守聚合酶鏈反應(yīng)規(guī)律,與模板DNA互補配對的Taqman探針被切斷,熒光素游離于反應(yīng)體系中,在特定光激發(fā)下發(fā)出熒光,隨著循環(huán)次數(shù)的增加,被擴增的目的基因片段呈指數(shù)規(guī)律增長,通過實時檢測與之對應(yīng)的隨擴增而變化熒光信號強度,求得Ct值,同時利用數(shù)個已知模板濃度的標(biāo)準(zhǔn)品作對照,即可得出待測標(biāo)本目的基因的拷貝數(shù)。
熒光-PCR法服務(wù)流程:
1.客戶認(rèn)真寫好訂單,提供待檢基因相關(guān)信息;
2.簽訂技術(shù)服務(wù)合同,支付預(yù)付款(30-50%);
3.設(shè)計合成定量PCR引物(或客戶提供文獻引物委托本公司合成);
4.DNA/RNA的抽提、定量、RNA反轉(zhuǎn)錄;
5.PCR預(yù)實驗,主要檢測引物的特異性和擴增效率;
6.正式定量實驗:對所有樣品上機檢測;
7.實驗結(jié)果和數(shù)據(jù)分析,形成報告。