技術(shù)文章
用鑒定試劑盒做微生物生化鑒定操作流程與注意事項(xiàng)
閱讀:1860 發(fā)布時(shí)間:2021-5-17生化鑒定試劑盒HiBio-ID™,試劑盒包含生化鑒定卡、輔助試劑、結(jié)果詮釋表和標(biāo)準(zhǔn)菌種表。一個(gè)生化鑒定卡上集成了12種或24種生化試驗(yàn),將反應(yīng)后的顯色結(jié)果與《結(jié)果詮釋表》、《菌種標(biāo)準(zhǔn)表》比對(duì)后,從而對(duì)菌種作出鑒定。
操作流程:
1,準(zhǔn)備接種液
①待測(cè)菌株需要先分離純化。只有純化的菌株才能用于檢測(cè)??捎闷胀ㄅ囵B(yǎng)基如營(yíng)養(yǎng)瓊脂(#M001)或適合的鑒別培養(yǎng)基分離菌株。(具體培養(yǎng)基以說(shuō)明書(shū)為準(zhǔn))
②挑取單個(gè)菌落,接種到5ml腦心浸出液肉湯,在35-37℃培養(yǎng)4-6小時(shí),直到菌液濁度達(dá)到產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)上的要求。一些苛養(yǎng)菌可能需要孵育6小時(shí)以上。在這種情況下,孵育應(yīng)使接種液濁度達(dá)到OD值或McFarland濁度標(biāo)準(zhǔn)。
③遵循產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)的要求操作。
注意:如果接種液濁度<0.1OD或0.5 McFarland標(biāo)準(zhǔn),可能會(huì)得到錯(cuò)誤的假陰性結(jié)果。
2,接種
①無(wú)菌打開(kāi)試劑盒,撕去密封箔。
②采用表面接種方法,在鑒定卡上每孔加50μl上述接種液。每孔用接種環(huán)涂抹接種。
3,孵育
HiBio-ID™生化鑒定卡中,貨號(hào)為KB001--KB014的產(chǎn)品,均在35℃±2℃培養(yǎng)18-24小時(shí),只有KB006例外,需在室溫(22-25℃)孵育48-72小時(shí)。
4,試劑
必要時(shí)需要添加其他顯色試劑,培養(yǎng)結(jié)束后,個(gè)別微孔需要加入1-2滴顯色劑,等待幾秒鐘或幾分鐘。顏色發(fā)生變化。
5,讀取結(jié)果
人工讀取結(jié)果:顯色結(jié)果與《結(jié)果詮釋表》比對(duì),確定是否存在陽(yáng)性反應(yīng)。再根據(jù)《菌種標(biāo)準(zhǔn)表》完成鑒定/或用HiBio-ID™Readers生化鑒定儀鑒定。
注意事項(xiàng):
1. 試驗(yàn)前,將試劑盒從冰箱取出,放置在室溫。
2. 某些菌的糖發(fā)酵可能不顯著,這時(shí)可記錄為±,孵育延長(zhǎng)至48小時(shí)。之后顯示為橘黃色則為陰性。
3. 對(duì)于賴(lài)氨酸和鳥(niǎo)氨酸脫羧試驗(yàn),孵育可能需要延長(zhǎng)至48小時(shí)。
4. 如果菌種出現(xiàn)矛盾的結(jié)果,可能因?yàn)榫N突變或用于分離培養(yǎng)的培養(yǎng)基的緣故。