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技術(shù)文章

介紹抗體的保存

閱讀:455          發(fā)布時(shí)間:2022-8-1

抗體的保存方法一般會(huì)直接影響抗體的活性和使用效果。在保存得當(dāng)?shù)那闆r下,大部分抗體可以存放數(shù)月甚至數(shù)年,一般情況需嚴(yán)格按照抗體說明書來進(jìn)行保存。

一、抗體保存溫度和條件:

1、 抗體收到后,需在12000rpm離心1~5分鐘,再打開管蓋進(jìn)行分裝和保存,如果抗體體積不足50 ul,可延長(zhǎng)離心時(shí)間至 5 分鐘,從而確??贵w全部離心下來。

2、對(duì)于多數(shù)抗體而言,分裝成小等份并凍存于-20℃或-80℃是不錯(cuò)之選。腹水形式的產(chǎn)品收到后需立即凍存,因?yàn)樵擃惍a(chǎn)品含有大量的蛋白酶,長(zhǎng)期在置于4℃條件會(huì)導(dǎo)致抗體的降解。

分裝成小等份可最da程度減少由凍融造成的損傷,以及從單個(gè)試劑瓶中多次吸取而引入的污染。

小等份只需凍融一次,如有剩余,可將剩余物保存于4℃。小等份的量取決于實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)驗(yàn)中通常采用的量。小等份應(yīng)不小于10μl;等份越小,儲(chǔ)液濃度因抗體蒸發(fā)及吸附于保存瓶表面而受到的影響越大。

抗體工作液應(yīng)該當(dāng)天配制當(dāng)天用完,在4℃盡量不要超過1天。

3、抗體的運(yùn)輸:一般選擇4℃運(yùn)輸,避免了反復(fù)凍融對(duì)抗體活性的損害;如若選擇干冰運(yùn)輸,收到抗體是冰凍的,分裝時(shí)解凍,會(huì)增加一次凍融的過程,所以運(yùn)輸過程中盡量避免干冰運(yùn)輸。

特殊抗體保存條件:

酶聯(lián)抗體:保存在4℃,避免凍存以降低或喪失酶活性;

偶聯(lián)抗體:需保存在棕色管或是用錫箔紙避光于4℃保存,熒光抗體對(duì)光敏感,操作時(shí)應(yīng)嚴(yán)格避光;

IgG3的同型對(duì)照:保存于4℃避免凍存,反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致抗體變性,形成多聚體;

二、抗體保存注意事項(xiàng):

1、 加入甘油:對(duì)于大多數(shù)抗體,可加入50%的甘油來避免反復(fù)凍融。甘油在-20℃可降低冰點(diǎn),但不建議加入甘油的抗體保存于-80℃,該溫度已經(jīng)超過了甘油的冰點(diǎn);

2、 加蛋白保護(hù)劑:蛋白在高濃度時(shí)不易降解,正如有些抗體會(huì)加入BSA作為穩(wěn)定劑的原因,同時(shí)加入蛋白也可減少抗體由于管壁吸附所造成的損失。但是如果抗體要用來標(biāo)記的話,則不能加入蛋白穩(wěn)定劑,因?yàn)檫@些穩(wěn)定劑會(huì)和抗體一起競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合標(biāo)記物。

3、加入疊氮化na:為了防止微生物污染,經(jīng)常選擇加入疊氮化na到抗體中(終濃度 0.02% (w/v))。但在下述情況中不能使用疊氮化na:

1)、抗體用于染色或處理活細(xì)胞,用于體內(nèi)研究。疊氮化na在抵抗微生物的同時(shí),對(duì)其它大部分有機(jī)物也是有毒的,因?yàn)樗钄嗔司€粒體的 細(xì)胞色素電子傳遞系統(tǒng)cytochrome electron transportsystem。

2)、要偶聯(lián)帶有氨基的抗體。疊氮化na會(huì)干擾任何含有氨基的偶聯(lián),因此在進(jìn)行偶聯(lián)之前,應(yīng)將疊氮化na去除。偶聯(lián)后的抗體可以加入疊氮化na保存,但是濃度只能是0.01%。對(duì)于需要偶聯(lián)的抗體,硫柳汞 (merthiolate)可以替代疊氮化na作為保護(hù)劑。

此外,如果需要去除疊氮化na,可以通過凝膠電泳或過濾的方式(IgG 的分子量是 150kDa,疊氮化na的分子量只有65Da),使用cut off 14kDa的濾膜即可將疊氮化na從抗體中去除。

   

 

 

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