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技術(shù)文章

ELISA檢測樣本細胞收集處理

閱讀:99          發(fā)布時間:2025-4-1

利用ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)進行檢測的樣本類型包括常見的血液(血清、血漿),組織勻漿、細胞裂解液、細胞培養(yǎng)上清以及不常見的皮膚組織、尿液、糞便、肺泡灌洗液、唾液、腦脊液、胸腹水等,這些樣本收集的時間、處理方法和保存都會影響到ELISA實驗的結(jié)果。下面整理了常見細胞樣本處理方法供大家參考。

 

 

 

 

 

一、如何選擇細胞樣本收集方式

細胞樣本根據(jù)目的物所在部位可選擇細胞裂解液或細胞培養(yǎng)上清作為樣本。

- 目的物是分泌型,主要在胞外,即可選擇細胞培養(yǎng)上清作為樣本,細胞培養(yǎng)上清處理方法相對簡單,取細胞培養(yǎng)上清,1000 × g離心 20 分鐘,取上清即可檢測。

- 目的物主要存在于胞內(nèi),則建議選擇細胞裂解液作為樣本類型。

需要注意的是: 因該類樣本干擾因素較多,如細胞狀態(tài)、細胞數(shù)量、pH、培養(yǎng)基鹽離子濃度、采樣時間等,所以可能存在檢測不到的情況。

二、細胞裂解液收集方法

1.貼壁細胞需要先用胰酶消化,離心收集細胞(懸浮細胞可直接離心收集);

2.將收集到的細胞用預(yù)冷的 PBS 3次;

3.物理方法裂解細胞(可先超聲破碎細胞,再反復凍融):

- 超聲破碎:取適量PBS 重懸細胞,用一定功率的超聲波處理細胞懸液,使細胞急劇震蕩破裂;

- 反復凍融:將待破碎的細胞在-20℃以下冰凍,室溫融解,反復3次,使細胞溶脹破碎;

4.將樣本于2-8 1500 × g 離心 10 分鐘,收集上清備用。

: 一般情況下,物理方法如反復凍融,勻漿等方法會比化學方法好,因為化學方法會引入酸或堿,可能會對ELISA實驗產(chǎn)生影響。利用化學的細胞裂解液裂解細胞,如果去污劑成分會干擾抗原抗體反應(yīng)影響檢測效果,推薦利用透析和超濾的方法去除去污劑成分。

三、樣本保存

1.處理樣本的過程就是收集目標蛋白的過程,由于蛋白容易變性,降解,故該過程應(yīng)盡量溫和。

2.樣本處理之后的儲存也非常重要,尤其注意不要反復凍融,樣本處理之后可按需分裝密封保存, 4 度保存應(yīng)小于 1 周,-20 度不應(yīng)超過 1 個月,-80度不應(yīng)超過2個月。

3.在檢測前,凍存樣本應(yīng)緩慢均衡恢復至室溫,不應(yīng)加熱使之融解。

 

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