人ELISA試劑盒試驗(yàn)時(shí)可能遇到的問(wèn)題：
1、過(guò)長(zhǎng)(特別是室內(nèi)溫度較高時(shí))。
2、手工操作中，加樣板過(guò)多形成加樣后放入孵箱前等待時(shí)間。
3、加完標(biāo)本再加酶試劑時(shí)酶濺起孔外。.血清或血漿標(biāo)本別離欠好即進(jìn)行加樣。
 詳細(xì)留意事項(xiàng)：
1、血清標(biāo)本如是以無(wú)菌操作別離，則可以在2～8℃下保存一周，如為有菌操作，則主張冰凍保存。樣本的長(zhǎng)時(shí)間保存，應(yīng)在-70℃以下。
2、冰凍保存的血清標(biāo)本須留意防止因停電等形成的重復(fù)凍融。標(biāo)本的重復(fù)凍融所發(fā)生的機(jī)械剪切力將對(duì)標(biāo)本中的蛋白等分子發(fā)生損壞效果，然后引起假陰性成果。此外，凍融標(biāo)本的混勻亦應(yīng)留意，不要進(jìn)行劇烈振動(dòng)，重復(fù)倒置混勻即可。
3、標(biāo)本在保存中如呈現(xiàn)細(xì)菌污染所造成的的混濁或絮狀物時(shí)，應(yīng)離心沉積后取上清檢測(cè)。
4、要留意防止呈現(xiàn)嚴(yán)重溶血。血紅蛋白中含有血紅素基團(tuán)，其有類(lèi)似過(guò)氧化物的活性，因而，在以HRP為符號(hào)酶的ELISA測(cè)定中，如血清標(biāo)本中血紅蛋白濃度較高，則其就很簡(jiǎn)單在溫育過(guò)程中吸附于固相，然后與后邊參加的HRP底物反應(yīng)顯色。
5、樣本的收集及血清別離中要留意盡量防止細(xì)菌污染，一則細(xì)菌的成長(zhǎng)，其所排泄的一些酶可能會(huì)對(duì)抗原抗體等蛋白發(fā)生分化效果;二則一些細(xì)菌的內(nèi)源性酶如大腸桿菌的β-半乳糖苷酶自身會(huì)對(duì)用相應(yīng)酶作符號(hào)的測(cè)定方法發(fā)生非特異性攪擾。
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