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產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1285 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 食管組織 | 種屬來源 | 人 |
| 生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 成纖維樣細胞 |
詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 人食管成纖維細胞 | 商品貨號 | A01X1285 |
組織來源 | 食管組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 人 | 傳代特性 | 細胞特性確定傳代 |
生長特性 | 貼壁培養(yǎng) | 細胞形態(tài) | 成纖維樣細胞 |
細胞簡介 |
食管是咽和胃之間的消化管，哺乳動物的食管結構上由內(nèi)向外分四層:黏膜層、黏 膜下層、肌層、外膜。成纖維細胞是疏松結締組織的主要細胞成分，其中外膜主 要都是成纖維細胞構成的疏松結締組織， 食管通過其與食管周圍的器官相連。黏 膜下層,為厚的疏松結締組織構成,內(nèi)部包含食管腺， 可分泌粘液排入食管腔。 食管 癌的發(fā)生中由正常成纖維細胞轉(zhuǎn)化而來的活化的癌相關纖維母細胞是腫瘤間質(zhì)微 環(huán)境內(nèi)的主要效應細胞， 研究證實， 包括食管癌在內(nèi)的多種腫瘤組織內(nèi)的癌相關 纖維母細胞，與正常成纖維細胞相比，在形態(tài)結構、生長方式、增殖活性、運動 能力等發(fā)面均發(fā)生了顯著變化， 并且能夠分泌大量的促進腫瘤細胞增殖、血管新 生的信號分子以介導上皮-間質(zhì)之間復雜的相互作用。 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代成纖維細胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相： 空氣，95%；CO2 ，5%
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁培養(yǎng)細胞，細胞形態(tài)呈成纖維樣細胞，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
赤狐腎上皮樣細胞
赤狐皮膚成纖維樣細胞
果子貍肺成纖維樣細胞
大額牛皮膚細胞
黃牛皮膚細胞
牦牛皮膚細胞
豹貓皮膚成纖維樣細胞
狗肺成纖維樣細胞
轉(zhuǎn)化細胞
正常人EBV-轉(zhuǎn)化淋巴細胞
人肺轉(zhuǎn)化細胞
SK-GT-2
G418抗性的小鼠胚胎成纖維細胞（干細胞庫保藏）
小鼠Mo-MuLv感染的3T3細胞
小鼠SRSV轉(zhuǎn)化的3T3細胞
腸桿菌屬Enterobacter sp.
腸結腸炎耶爾森亞種Yersinia enterocolitica subsp.‖enterocolitica│(Schleifstein and Coleman) Frederiksen
腸膜明串珠菌Leuconostoc mesenteroides
腸膜明串珠菌腸膜亞種Leuconostoc mesenteroides subsp. mesenteroides
腸擬桿菌Bacteroides intestinalis
腸侵襲性大腸埃希氏菌Escherichia coli EIEC
腸球菌屬Enterococcus sp.
腸沙門氏菌腸亞種Salmonella enterica subsp. enterica
腸沙門氏菌腸亞種波那雷恩血清型Salmonella enterica subsp. enterica serotype Bonariensis
腸沙門氏菌腸亞種腸炎血清型Salmonella enterica subsp. enterica serotype Enteritidis
人食管成纖維細胞腸沙門氏菌腸亞種雞血清型Salmonella enterica subsp. enterica serotype Gallinarum
腸沙門氏菌腸亞種血清型Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhi
腸沙門氏菌腸亞種耶路撒冷血清型Salmonella enterica subsp. enterica serotype Jerusalem
腸沙門氏菌腸亞種嬰兒血清型Salmonella enterica subsp. enterica serovar Enteritidis
腸沙門氏菌腸亞種豬霍亂血清型Salmonella enterica subsp. enterica (ex Kauffmann and Edwards) Le Minor and Popoff serovar Choleraesuis
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