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詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 大鼠大隱靜脈內皮細胞 | 商品貨號 | A01X1550 |
組織來源 | 大隱靜脈組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 大鼠 | 傳代特性 | 可傳2-3代 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 內皮細胞樣 |
細胞簡介 |
大鼠大隱靜脈內皮細胞分離自大隱靜脈；大隱靜脈起于足背靜脈弓內側端，經(jīng)內踝前方，沿小腿內側緣伴隱神經(jīng)上行，經(jīng)股骨內側髁后方，進入大腿內側部，與股內側皮神經(jīng)伴行，逐漸向前上，在恥骨結節(jié)外下方穿隱靜脈裂孔，匯入股靜脈，其匯入點稱為隱股點。有5條屬支：旋髂淺靜脈、腹壁淺靜脈、外靜脈、股內側淺靜脈和股外側淺靜脈，它們匯入大隱靜脈的形式多樣，相互間吻合豐富。大隱靜脈曲張行高位結扎時，須分別結扎、切斷各屬支，以防復發(fā)。大隱靜脈內皮細胞對維持大隱靜脈動態(tài)平衡起著重要作用。它們合成、分泌凝血和纖溶系統(tǒng)的激活因子和抑制因子、影響血小板粘附和聚集的調節(jié)因子；大隱靜脈內皮細胞還釋放控制細胞增殖和調節(jié)血管壁緊張度的分子。 |
包被條件： PLL(0.1mg/ml)，明膠(0.1%)
培養(yǎng)基：含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：1:2
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質。
五、大腦皮質放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈內皮細胞樣，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。
5)原瓶內貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠乳腺成纖維細胞
大鼠乳腺上皮細胞
大鼠軟骨細胞
大鼠腮腺細胞
大鼠三叉神經(jīng)元細胞
大鼠神經(jīng)干細胞
大鼠神經(jīng)小膠質細胞
大鼠神經(jīng)星形膠質細胞
大鼠腎成纖維細胞
大鼠腎動脈內皮細胞
大鼠腎動脈平滑肌細胞
大鼠腎皮質上皮細胞
大鼠腎實質細胞
大鼠腎小管上皮細胞
大鼠腎小球內皮細胞
舞蹈擬土地桿菌Pseudopedobacter saltans
奧托氏菌（加詞待譯）Ottowia pentelensis
中國臺灣別樣海源菌Aliidiomarina taiwanensis
輪蟲弧菌Vibrio rotiferianus
遠青弧菌Vibrio azureus
巴利阿里假單胞菌Pseudomonas balearica
黏著劍菌Ensifer adhaerens
蒙氏假單胞菌Pseudomonas monteilii
爛泥假單胞菌Pseudomonas peli
成對桿菌Dyadobacter sp.
大鼠大隱靜脈內皮細胞居海假單胞菌Pseudomonas marincola
屋久島戴沃斯氏菌Devosia yakushimensis
硫氧化湖沉積桿菌Limnobacter thiooxidans
獨島海單胞菌Marinomonas dokdonensis
羅素左貝爾氏菌Zobellia russellii
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