化工儀器網(wǎng)
產(chǎn)品簡介
| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
|---|---|---|---|
| 貨號 | A01X1928 | 主要用途 | 僅供科研研究實驗 |
| 組織來源 | 正常外周血組織 | 種屬來源 | 小鼠 |
| 生長特性 | 懸浮 |
詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 小鼠B淋巴細胞 | 商品貨號 | A01X1928 |
組織來源 | 正常外周血組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 小鼠 | 傳代特性 | 根據(jù)細胞特性 |
生長特性 | 懸浮 | 細胞形態(tài) |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代B淋巴細胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞簡介 |
B淋巴細胞的祖細胞存在于胎肝的造血細胞島中，此后B淋巴細胞的產(chǎn)生和分化場所逐漸被骨髓所代替。成熟的B細胞主要定居于淋巴結(jié)皮質(zhì)淺層的淋巴小結(jié)和脾臟的紅髓和白髓的淋巴小結(jié)內(nèi)。B細胞在抗原刺激下可分化為漿細胞，漿細胞可合成和分泌抗體（免疫球蛋白），主要執(zhí)行機體的體液免疫。 B細胞在骨髓內(nèi)分化各階段的主要變化為免疫球蛋白基因的重排和膜表面標志的表達。B細胞在發(fā)育分化過程中，同樣也經(jīng)歷選擇作用，以除去非功能性基因重排B細胞和自身反應(yīng)性B細胞，形成周圍成熟的B細胞庫。B細胞表面有多種膜表面分子，識別抗原、與免疫細胞和免疫分子相互作用，也是分離和鑒別B細胞的重要依據(jù)。B細胞表面分子主要有白細胞分化抗原、MHC以及多種膜表面受體。 |
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預(yù)冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
原代細胞使用方法：
是一種懸浮細胞，細胞形態(tài)呈，在技術(shù)部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關(guān)實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預(yù)熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
小鼠雜交瘤細胞株；SAH301
小鼠雜交瘤細胞株；2-1
小鼠雜交瘤細胞株；MA-3G6
小鼠雜交瘤細胞株；DN-H12
抗ALV-A雞胚成纖維細胞系；DF-1/A
小鼠雜交瘤細胞株；DN-2H5
小鼠雜交瘤細胞株；MA-4G8
小鼠雜交瘤細胞株；1H10
小鼠雜交瘤細胞株；MA-1G2
小鼠雜交瘤細胞株；14E4
中國倉鼠卵巢細；胞CHO-S/K7OE10-1D6
小鼠雜交瘤細胞株；11A7
中國倉鼠卵巢細胞；CHO-S/H9C2
小鼠潘氏細胞雜交瘤細胞株；GCLP
小鼠雜交瘤細胞株；4-1
液體乳糖培養(yǎng)基
China Blue Agar
液體亞硒鹽胱培養(yǎng)基
連四硫酸鹽培養(yǎng)基
Tetrathionate Medium
煌綠瓊脂培養(yǎng)基
Brilliant Green Agar Medium
XLD瓊脂培養(yǎng)基
XyloseLysineDesoxycholate Agar Medium
亞硫酸鉍瓊脂培養(yǎng)基
小鼠B淋巴細胞Bismuth Sulfite Agar Medium
麥康凱瓊脂培養(yǎng)基
Maconkey Agar Medium
伊紅美藍瓊脂培養(yǎng)基（Levine）
Levine EosinMethylene Blue Agar Medium
化工儀器網(wǎng)