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詳細介紹
一、細胞基本屬性：
細胞名稱 | 人直腸成纖維細胞 | 商品貨號 | A01X1303 |
組織來源 | 直腸組織 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶 |
種屬來源 | 人 | 傳代特性 | 根據(jù)細胞特性 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態(tài) | 成纖維樣細胞 |
包被條件：
培養(yǎng)基：原代成纖維細胞培養(yǎng)體系
換液頻率：每2-3天換液一次
傳代比例：
消化液：0.25%胰蛋bai酶
培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%
細胞簡介 |
直腸是自肛緣起向上15cm的一段大腸。直腸周圍多脂肪、無縱帶，位于膀胱和生殖器官的背側(cè)。 直腸橫切面由內(nèi)到外依次為：粘膜（上皮層，固有層，粘膜肌層），粘膜下層，肌層，外膜。 成纖維細胞是疏松結締組織的主要細胞成分，腫瘤間質(zhì)對腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著重要作用。成纖維細胞是腫瘤間質(zhì)的重要組成成分,與腫瘤復發(fā)、轉(zhuǎn)移等密切相關。腫瘤間質(zhì)中成纖維細胞活化為癌相關成纖維細胞是腫瘤細胞-成纖維細胞相互作用過程中的一個重要過程,是成纖維細胞發(fā)揮腫瘤調(diào)節(jié)作用的關鍵。同時成纖維細胞的變化也與許多其他直腸疾病密切相關。 |
原代細胞實驗步驟：
一、取7-10d雄性SD大鼠，頸椎脫臼處死,浸泡于75％乙醇消毒3-5min。
二、在超凈工作臺中，將大鼠斷頭置于玻璃培養(yǎng)皿中，打開顱腔后取出全腦,放在盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中，去除小腦和間腦。
三、將大腦半球在干濾紙上緩慢滾動以去除軟腦膜和腦膜大血管，再放在新的盛有預冷的PBS玻璃培養(yǎng)皿中。
四、用細解剖鑷去除大腦白質(zhì)、殘余大血管和軟腦膜，保留大腦皮質(zhì)。
五、大腦皮質(zhì)放于DMEM中，剪碎成約1mm3大小，放入50ml的離心管中，加入混合酶液I(0.05-0 .1％II型膠原酶，0 .025-0 .05％IV型膠原酶，200-400U DNaseI)，混勻后37℃水浴消化1-1.5h。
六、室溫1 000×g離心8min，去上清液。
七、沉淀中加入20％BSA重懸浮，充分混勻，1 000×g，20min，4℃離心，去上清。
八、沉淀加入4ml混合酶液II( 0.05-0.1％的膠原酶/分散酶，0.05-0.1％I型膠原酶，100-300U DNaseI )重懸浮，混勻，37℃水浴消化0.5-1h，700×g室溫離心6min，去上清液。
九、沉淀加入2ml DMEM培養(yǎng)液懸浮混勻，鋪于經(jīng)離心形成連續(xù)梯度的12ml 50％Percoll(25 000×g，60min，4℃)，1000×g，4℃離心10min。
十、靠近底部的紅細胞層之上的白黃色的層面即為純化的微血管段，吸出后DMEM
漂洗兩次(離心1000×rpm，6min，室溫)，去上清液。
加入DMEM培養(yǎng)液(20％FBS，4ug/ml嘌呤霉素 )重懸浮，接種于含5％的大鼠 血清37℃孵育過夜所制備的細胞培養(yǎng)皿中，置于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱內(nèi)靜置培養(yǎng)24h后更換不含嘌呤霉素的混合培養(yǎng)基，隨后隔天換液。
原代細胞使用方法：
是一種貼壁細胞，細胞形態(tài)呈成纖維樣細胞，在技術部標準操作流程下，細胞可傳2-3代；建議您收到細胞后盡快進行相關實驗。
客戶收到細胞后，請按照以下方法進行操作。
1. 取出T25細胞培養(yǎng)瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4h，以穩(wěn)定細胞狀態(tài)。
2. 貼壁細胞消化
1)吸出T25細胞培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基，用PBS清洗細胞一次；
2)添加0.25%消化液1mL至T25培養(yǎng)瓶中，輕微轉(zhuǎn)動培養(yǎng)瓶至消化液覆蓋整個培養(yǎng)瓶底后，吸出多余消化液，37℃溫浴1-3min；倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后，再加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)用吸管輕輕吹打混勻，按傳代比例接種T25培養(yǎng)瓶傳代，然后補充新鮮的培養(yǎng)基至5mL，置于37℃、5%CO2、飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基。
3. 細胞收貨脫落
1)收集所有細胞懸液，1000rpm，離心5min，保留沉淀；
2)添加0.25%消化液0.5mL至離心管中，重懸沉淀，放置于37℃消化3min(或4℃冰箱靜置5-7min)；消化完向離心管內(nèi)加入5ml培養(yǎng)基終止消化；
3)經(jīng)1000rpm，離心5min，丟棄上清，用5ml培養(yǎng)基重懸沉淀，接種于新的培養(yǎng)瓶內(nèi)；
4)待細胞貼壁后，培養(yǎng)觀察；之后按照換液頻率更換新鮮的培養(yǎng)基(37℃預熱)。
5)原瓶內(nèi)貼壁細胞按正常消化處理。
4. 細胞實驗
因原代細胞貼壁特殊性，貼壁的原代細胞在消化后轉(zhuǎn)移至其他實驗器皿（如玻璃爬片、培養(yǎng)板、共聚焦培養(yǎng)皿等）時，需要對實驗器皿進行包被，以增強細胞貼壁性，避免細胞因沒貼好影響實驗；包被條件常選用鼠尾膠原Ⅰ（2-5μg/cm2） ，多聚賴氨酸PLL（0.1mg/ml），明膠（0.1%），依據(jù)細胞種類而定。懸浮/半懸浮細胞無需包被。
公司正在出售的產(chǎn)品：
人腎小球系膜細胞，HRMCC細胞
人腎足細胞
人食管成纖維細胞，HEF細胞
人食管平滑肌細胞，HESMCC細胞
人食管上皮細胞，HEECP細胞
人視網(wǎng)膜muller細胞
人視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細胞，HEMEC細胞
人輸卵管平滑肌細胞
人輸卵管上皮細胞
人輸尿管平滑肌細胞
人輸尿管上皮細胞
人胎盤間充質(zhì)干細胞
人胎盤絨毛膜滋養(yǎng)層細胞
人胎盤微血管內(nèi)皮細胞
人外周血單個核細胞
廬山鏈霉菌Streptomyces lushanensis
魯氏不動桿菌Acinetobacter lwoffii
魯氏酵母Saccharomyces rouxii Boutroux
魯氏接合酵母Zygosaccharomyces rouxii(Saito)Lodd
魯氏毛霉Mucor rouxianus(Calmette)Wehmer
路德維希腸桿菌Enterobacter ludwigii
路鄧葡萄球菌Staphylococcus lugdunensis Freney et al.
路氏乳桿菌Lactobacillus reuteri
輪層炭菌屬Daldinia sp.
輪枝狀鐮刀菌Fusarium verticillioides (Saccardo) Nirenberg
人直腸成纖維細胞羅根腸桿菌Enterobacter roggenkampii
羅倫隱球酵母Cryptococcus laurentii
羅伊氏短芽孢桿菌Brevibacillus reuszeri
羅伊氏乳桿菌Lactobacillus reuteri
羅伊氏粘液乳桿菌Limosilactobacillus reuteri
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