同位素標(biāo)記載體/蛋白類在小鼠等體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)

西安瑞禧生物科技有限公司可以提供同位素標(biāo)記的蛋白類或者納米載體或相關(guān)介質(zhì)的的代動力學(xué)實(shí)驗(yàn)外包服務(wù)，我們可以提供關(guān)于在體內(nèi)的吸收、分布、、排泄試驗(yàn)等等數(shù)據(jù)。

針對于目前的生物技術(shù)類在嚙齒類中的代動力學(xué)研究中，通常利用同位素示蹤技術(shù)研究其在體內(nèi)的吸收、分布、、排泄試驗(yàn)等，從而獲得該在嚙齒類體內(nèi)的代動力學(xué)參數(shù)、分布特征，及排泄特征等。下面根據(jù)利用同位素示蹤技術(shù)研究的代動力學(xué)的內(nèi)容介紹核學(xué)應(yīng)用研究室所具備的條件和需要之處。

1. ¹²⁵I 同位素標(biāo)記技術(shù)

主要利用Iodogen 法或氯胺-T法將¹²⁵I 標(biāo)記到目標(biāo)蛋白上，標(biāo)記過程嚴(yán)格按照所用的標(biāo)記方法進(jìn)行操作。于98%的蛋白類，且不含賦形劑或穩(wěn)定劑，基本全部能夠標(biāo)記。

標(biāo)記之后的標(biāo)記物會利用放射性薄層掃描儀或放射性HPLC對標(biāo)記物進(jìn)行標(biāo)記率的測定，然后利用分子篩凝膠色譜對標(biāo)記物進(jìn)行分離純化，收集的分離液體分別進(jìn)行放射性cpm計(jì)數(shù)和蛋白濃度的測定。終收集放射性計(jì)數(shù)和蛋白濃度的分離液體，并利用放射性薄層掃描儀或放射性HPLC對其進(jìn)行放化純度鑒定，要求放化于96%方可進(jìn)行后續(xù)代特性的研究。

2. 三氯醋酸（TCA）沉淀法測定¹²⁵I-受試含量的方法學(xué)確證

    取正常SD大鼠血清、心、、脾、、腎、胸腺、脂肪、肌肉、腸內(nèi)容物和尿等12種器官/組織或體液及緩沖液。制成勻漿，加入3-5個(gè)不同蛋白含量的放射性¹²⁵I-受試，樣本混勻后，加入等量20 %TCA沉淀蛋白，測定組織總放射性；離心后吸出上清，g計(jì)數(shù)儀測定上清中g放射性。利用所獲得的數(shù)據(jù)建立不同組織的蛋白濃度-放射性計(jì)數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)曲線，并進(jìn)行其方法學(xué)驗(yàn)證（主要包括方法的特異性、靈敏度、線性和精密度、回收率等）。

3. 濃度-時(shí)間曲線

實(shí)驗(yàn)所需的SD 大鼠、Balb/c 小鼠等購買于北京維通利華，能夠提供實(shí)驗(yàn)的合格證。核學(xué)應(yīng)用研究室具有專一的飼養(yǎng)室，飼養(yǎng)為IVC獨(dú)立送風(fēng)，小鼠飼養(yǎng)區(qū)有56籠，大鼠飼養(yǎng)區(qū)25籠，飼養(yǎng)和空間能夠滿足少2個(gè)代同時(shí)進(jìn)行且互不干擾。

非代動力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則（稿）中指出，以血濃度-時(shí)間曲線的每個(gè)采樣點(diǎn)一般不少于6個(gè)數(shù)據(jù)為限計(jì)算所需數(shù)。建議受試采用雌雄各半。我們會根據(jù)指導(dǎo)原則中的要求進(jìn)行采樣時(shí)間的設(shè)定，為采樣點(diǎn)，我們會在正式試驗(yàn)前進(jìn)行預(yù)試驗(yàn)，然后根據(jù)預(yù)試驗(yàn)的結(jié)果，審核并修正原設(shè)計(jì)的采樣點(diǎn)。的注射和熟練的采血技術(shù)能夠滿足此項(xiàng)實(shí)驗(yàn)順利進(jìn)行。取血后離心取血清，血清加入等量20 %TCA沉淀蛋白，測定總γ放射性；離心后分別測定沉淀部分和上清部分的γ放射性。濃度以當(dāng)量濃度（ng Equ·mL^-1）表示。根據(jù)試驗(yàn)中測得的各受試的血濃度-時(shí)間數(shù)據(jù)，求得主要代動力學(xué)參數(shù)。靜脈注射，應(yīng)提供t1/2（半衰期）、Vd（表觀分布容積）、AUC（血濃度-時(shí)間曲線下面積）、CL（率）等參數(shù)值；外，應(yīng)提供Cmax和Tmax（達(dá)峰時(shí)間）、 t1/2（半衰期）等參數(shù)。

4. 組織分布

我們會根據(jù)非代動力學(xué)研究技術(shù)指導(dǎo)原則（稿）和所獲得的血濃度-時(shí)間曲線數(shù)據(jù)選取3-4個(gè)時(shí)間點(diǎn)分別代表吸收相、平衡相和相的分布。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)6只實(shí)驗(yàn)，雌性各半，在盡可能的將體內(nèi)全部放出后，分別取出取胸腺、心臟、臟、、脾臟、腎上腺、、膀胱、生殖腺、腸淋巴結(jié)、腸內(nèi)容物、空腸、脂肪、肌肉、骨髓、腦、血清和尿液等組織，稱重后將組織勻漿、TCA沉淀、離心后分別測定上清和沉淀內(nèi)放射性計(jì)數(shù)。以ng Equ·g^-1鮮濕重或ng Equ·mL^-1體積表示放射性濃度。

5. 糞尿排泄試驗(yàn)

將放入籠內(nèi)，選定一個(gè)劑量后，按一定的時(shí)間間隔分段收集尿或糞的全部樣品，測定濃度。糞樣品收集后按一定比例制成勻漿，記錄總體積，取部分樣品進(jìn)行含量測定。計(jì)算經(jīng)此途徑排泄的速率及排泄量，直收集到的樣品測定不到為止。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)少有5只的試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

6. 膽汁排泄試驗(yàn)

     6只SD大鼠 (雄3只，雌3只，體重200 ± 20g) ，用戊巴比妥那麻醉，切開腹腔，分離膽總管，遠(yuǎn)端結(jié)扎，近端插入引流管引流膽汁，注射后收集膽汁，測定γ放射性，計(jì)算排出放射性占注入放射性量的百分?jǐn)?shù)。

    擬開展大鼠在膽汁插管后，清醒狀態(tài)下收集膽汁，目前正在聯(lián)系相關(guān)實(shí)驗(yàn)技術(shù)人員。

7. 血漿蛋白結(jié)合試驗(yàn)

取正常大鼠血漿，每管200 mL，分別加入不同濃度的¹²⁵I-受試。4°C 過夜或37°C水浴5 min后，取血漿直接放射性薄層層析或于放射性HPLC進(jìn)樣。利用放射性薄層掃描或者連接有放射性檢測器的HPLC 直接檢測，并利用儀器所帶有的軟件處理放射性色譜圖。

基于原有的U-3000 HPLC和連接的放射性檢測器，目前正在購買TSK-3000 蛋白柱并進(jìn)行試驗(yàn)，如果能夠試驗(yàn)，血漿蛋白結(jié)合試驗(yàn)、生物樣品中（、膽汁、尿液）中的原形檢測均能夠檢測。

8. 試驗(yàn)中所需儀器