靶向性差及原性相互制約、、靶向的載體成為關鍵問題。采用如脂質體、殼聚糖、聚乙烯亞胺(PEI)、多聚賴氨酸(PLL)及PAMAM-D等,其中PAMAM-D作為一種人工的納米分子聚合物,是具應用的載體之一。
PAMAM-D的主要有:無原性;保護目的不受血漿及組織中補體及的破壞,可由;易與特異性靶向分子偶聯(lián);與的其它非載體如PEI及PLL等相比,分子大小易控制的。
對于修飾的PAMAM-D(folate-PAMAM-D)靶向性不多,用修飾G5-PAMAM-D(G5-PAMAM-D-fol)作為載體在體外將pcDNA3-tk質粒導入PC-3和LNCaP中,再給予前體GCV,考察其載體的可行性。
RT-PCR檢測HSV-TK在12孔培養(yǎng)板上設實驗組、陽性對照組及陰性對照組。以PC-3、LNCaP融合,移去培養(yǎng)基,用溫熱的PBS溶液洗滌后,用無血清培養(yǎng)基以G5-PAMAM-D-fol:peDNA3-tk質量比為3:1和G5-PAMAM-D:pcDNA3-tk質量比為3:1及pcDNA3-tk 1μg分別轉染。4~6h后換成有血清培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。轉染24h后提取RNA。
結論:修飾的G5-PAMAM-D能夠在體外將重組質粒轉入并表達HSV-TK,其作為載體靶向性,為將其應用于體內實驗研究了的基礎。在正常下,PAMAM-D因氨基端質子化而帶上正電荷,從而可以與帶負電的DNA相結合,形成納米尺寸的聚電解質復合物,該復合物具有很的穩(wěn)定性和溶解性。
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