ADC復(fù)合物由mAb、Linker和Payload三部分組成 ,故其分子性質(zhì)較為復(fù)雜,需要采用多種分析方法進(jìn)行表征。

一般需要采用基于分離的技術(shù)表征ADC的單體含量、游離和能力,例如:尺寸排阻色譜法(SEC)、反相色譜法(RPC)、疏水相互作用色譜(Hydrophobic interactionchromatography, HIC)等。此外,質(zhì)譜( Mass Spectroscopy , MS )可用于識別細(xì)微的分子結(jié)構(gòu)變化; SEC可用于對揮發(fā)性流動相中的ADC進(jìn)行脫鹽;在穩(wěn)定性期間還可采用SEC檢測ADC片段.

運用電噴霧電離質(zhì)譜(ESI-MS)技術(shù)可識別基于半胱氨酸偶聯(lián)技術(shù)的ADC的分布,其在于可準(zhǔn)確地觀察分子離子或準(zhǔn)分子子;通過液質(zhì)聯(lián)用(LCMS)與RPC相結(jié)合的方法可確認(rèn)偶聯(lián)類型和DAR。通常, LCMS技術(shù)用于Fc結(jié)構(gòu)域中含有保守N-低聚糖的還原或非還原性ADC的分析,以減少異質(zhì)性。

RPC和HIC為基于分子疏水性的分離方法中, RPC用于確定負(fù)荷、分布和異質(zhì)性,量化分析ADC混合物中的游離、ADC在不同儲存條件下的穩(wěn)定性以及表征通過重鏈或輕鏈附著到Linker.上的mAb。與RPC類似, HIC是另一種用于表征ADC疏水性的分析技術(shù),DAR較的ADC表現(xiàn)出疏水性,可通過HIC進(jìn)行表征。

此外,親水性相互作用色譜是-種比反相液相色譜的亞單位水平結(jié)合物表征技術(shù),運用LC-MS與HILIC相結(jié)合的方法可表征ADC的Payload和聚糖修飾;肽圖分析法(Peptide mapping)是研究特定ADC荷分布的另一種工具,多用于研究蛋白質(zhì)分子的一級結(jié)構(gòu)和確定蛋白質(zhì)分子內(nèi)表面暴露的表位.

法通于去除Fc結(jié)構(gòu)域中的保守N-低聚糖;生物分析測定法用于評估釋放的游離、抗體總量和DAR; ELISA是定量與mAbs相偶聯(lián)的Payload的方法; MS用于測定游離的濃度;基于特定配體的分析方法用于了解ADC的特異性結(jié)構(gòu),可作為早期篩選技術(shù);電化學(xué)發(fā)光技術(shù)已用于表征完整ADC分子的結(jié)合能力。

相關(guān)內(nèi)容：

靶向5T4的抗體美登素衍生物DM4偶聯(lián)

非氨基酸定點偶聯(lián)抗人類表皮因子受體2-抗體偶聯(lián)

非氨基酸的265SD單抗與MMAF偶聯(lián)

抗EGFR的抗體-偶聯(lián)物anti-EGFR-MMAE

TCO-PEG3-醛    TCO-PEG3-aldehyde

疊氮基-PEG3-SSPy     Azido-PEG3-SSPy

-PEG1-疊氮化物 Biotin-PEG1-azide

-PEG4-PFP酯 Biotin-PEG4-PFP ester

羥基-PEG1-酸  Hydroxy-PEG1-acid

-PEG3-胺  Folate-PEG3-amine

宮頸單克隆抗體—葡聚糖—氨甲喋呤偶合物

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