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Cy5.5熒光標(biāo)記抗體/蛋白試劑盒 (10~100 mg標(biāo)記量)
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 保存條件 |
熒光標(biāo)記抗體/蛋白試劑盒 | 標(biāo)記10~100 mg抗體/蛋白 | -20 ℃ |
一. 產(chǎn)品簡介
Cy5.5熒光標(biāo)記抗體/蛋白試劑盒可以通過抗體/蛋白上的伯胺基團(tuán)（如賴氨酸），簡單、快速地實現(xiàn)抗體/蛋白與Cy5.5熒光染料的共價偶聯(lián)。此為通用型試劑盒，適合Cy5.5熒光標(biāo)記各種分子量不一致的抗體/蛋白。偶聯(lián)在30分鐘內(nèi)即可完成，偶聯(lián)效率可達(dá)70%左右。使用超濾管純化，可快速去除多余的Cy5.5熒光染料，且不會損失抗體/蛋白。
二. 試劑盒組成與存儲
收到后將Cy5.5-mix(含10 % Cy5.5染料)儲存在-20?C。Coupling Reagent、Cy5.5-mix溶解液可在+4°C短期保存或-20°C長期保存。
試劑盒組成 | 數(shù)量 | 保存溫度 |
Cy5.5-mix (含10 % Cy5.5染料) | 10 mg | -20 ℃ |
Coupling Reagent | 2 mL | +4 ℃或-20 ℃ |
Cy5.5-mix溶解液 | 2 mL | +4 ℃或-20 ℃ |
超濾管 (3.5kD) | 2 支 | 室溫 |
三. 實驗步驟
1.取待標(biāo)記抗體/蛋白(1~10mg)，溶解于1 mL純水中，加入100 μL Coupling Reagent，混合均勻待用。
注：抗體/蛋白在1~10 mg內(nèi)均用1mL純水溶解，并加入100 μL Coupling Reagent。超出此范圍，請按比例增減，如0.5 mg抗體/蛋白，建議使用0.5 mL純水溶解并加入50 μL Coupling Reagent。
(以下步驟按標(biāo)記1 mg抗體/蛋白為例)
2. 根據(jù)熒光標(biāo)記需求程度，稱取0.1 ~1 mg Cy5.5-mix固體加至步驟1溶液，充分混合溶解。
注：(a) 若Cy5.5-mix用量超出1 mg，可能導(dǎo)致熒光標(biāo)記過量，引起熒光部分淬滅;
(b) 若低于1mg的Cy5.5-mix難以稱取，可先取mg Cy5.5-mix固體溶解于100μL Cy5.5-mix溶解液，再按需取Cy5.5-mix溶液加至步驟1溶液。由于Cy5.5-mix溶解后易分解，溶液須盡快使用且不可保存。
3. 室溫避光反應(yīng)30 min，延長反應(yīng)時間不影響偶聯(lián)效率。
4. 將反應(yīng)液轉(zhuǎn)移至超濾管，10000rpm超濾5min，即可除去未反應(yīng)的Cy5.5-mix，為提，可加入純水重懸抗體/蛋白，重復(fù)超濾1~2次。
5. 使用純水或PBS將超濾管截留下的抗體/蛋白重懸，即得到Cy5.5熒光標(biāo)記的抗體/蛋白溶液。
四. 注意事項
1. 熒光標(biāo)記前抗體/蛋白中可能含有干擾組分，建議低于以下比例:
干擾組分 | 建議比例 |
甘油 | < 50% |
NaN3 | < 0.1% |
含氨基的緩沖液（如Tris） | 0% |
pH | 7.0-8.5 |
伯胺（如氨基酸、乙醇胺等） | 0% |
硫醇（如巰基乙醇、DTT等） | 0% |
注：若以上干擾組分超出建議比例，可先通過超濾管或透析等方式除去干擾成分，再使用本試劑盒進(jìn)行抗體/蛋白熒光標(biāo)記。
2. 偶聯(lián)后的抗體/蛋白應(yīng)避光保存。通常在4℃下可保存6~12個月。如需保存更長時間，可加入冷凍保護(hù)劑如50%甘油，在-20℃保存。
