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環(huán)氧合酶-2ELISA試劑盒檢測試劑盒

時間:2018-10-10閱讀:368

環(huán)氧合酶-2ELISA試劑盒 檢測試劑盒

●分子實驗中常用生化試劑原理匯總● 1.溶菌酶:它是糖苷水解酶,能水解菌體細胞壁的主要化學成分肽聚糖中的β-1,4糖苷鍵,因而具有溶菌的作用。當溶液中pH小于8時,溶菌酶作用受到抑制。葡萄糖:增加溶液的粘度,維持滲透壓,防止DNA受機械剪切力作用而降解。 EDTA:(1)螯合Mg2+、Ca2+等金屬離子,抑制脫氧核糖核酸酶對DNA的降解作用(DNase作用時需要一定的金屬離子作輔基);(2)EDTA的存在,有利于溶菌酶的作用,因為溶菌酶的反應(yīng)要求有較低的離子強度的環(huán)境。 2.NaOH-SDS液: NaOH:核酸在pH大于5,小于9的溶液中,是穩(wěn)定的。但當pH>12或pH<3時,就會引起雙鏈之間氫鍵的解離而變性。在溶液II中的NaOH濃度為0.2mo1/L,加抽提液時,該系統(tǒng)的pH就高達12.6,因而促使染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性。 SDS:SDS是離子型表面活性劑。它主要功能有:(1)溶解細胞膜上的脂質(zhì)與蛋白,因而溶解膜蛋白而破壞細胞膜。(2)解聚細胞中的核蛋白。(3)SDS能與蛋白質(zhì)結(jié)合成為R-O-SO3-…R+-蛋白質(zhì)的復合物,使蛋白質(zhì)變性而沉淀下來。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用,所以在以后的提取過程中,必須把它去除干凈,防止在下一步操作中(用RNase去除RNA時)受到干擾。 3. 3mol/L NaAc(pH4.8)溶液: NaAc的水溶液呈堿性,為了調(diào)節(jié)pH至4.8,必須加入大量的冰醋酸。所以該溶液實際上是NaAc-HAc的緩沖液。用pH4.8的NaAc溶液是為了把pH12.6的抽提液,調(diào)回pH至中性,使變性的質(zhì)粒DNA能夠復性,并能穩(wěn)定存在。而高鹽的3mol/L NaAc有利于變性的大分子染色體DNA、RNA以及SDS-蛋白復合物凝聚而沉淀之。前者是因為中和核酸上的電荷,減少相斥力而互相聚合,后者是因為鈉鹽與SDS-蛋白復合物作用后,能形成較小的鈉鹽形式復合物,使沉淀更*。 4.為什么用無水乙醇沉淀DNA?用無水乙醇沉淀DNA,這是實驗中常用的沉淀DNA的方法。乙醇的優(yōu)點是可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會起任何化學反應(yīng),對DNA很安全,因此是理想的沉淀劑。 DNA溶液是DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在,當加入乙醇時,乙醇會奪去DNA周圍的水分子,使DNA失水而易于聚合。一般實驗中,是加2倍體積的無水乙醇與DNA相混合,其乙醇的終含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇來替代無水乙醇(因為無水乙醇的價格遠遠比95%乙醇昂貴)。但是加95%的乙醇使總體積增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA損失也增大,尤其用多次乙醇沉淀時,就會影響收得率。折中的做法是初次沉淀DNA時可用95%乙醇代替無水乙酵,后的沉淀步驟要使用無水乙醇。也可以用0.6倍體積的異丙醇選擇性沉淀DNA。一般在室溫下放置15-30分鐘即可。

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簡述快速檢測注意事項及采樣的注意事項? ● 檢測注意事項: ①對于陽性結(jié)果以及不合格結(jié)果的樣品:應(yīng)重復測試,排除偶然誤差。重要樣品,如含急性中毒物質(zhì)或可能會對后期處理帶來較大社會影響或較大經(jīng)濟損失的樣品,應(yīng)注意留樣,并將樣品送實驗室進一步確證。 ②對于陰性與陽性、合格與不合格之間不易判定的樣品:應(yīng)重復測試,以多次重復相同的結(jié)果報告之。 ● 采樣注意事項: ①為了監(jiān)測總體樣品的安全衛(wèi)生狀況,應(yīng)注意采樣的代表性原則。均衡地,不加選擇地從全部批次的各部分隨機性采樣。 ②為了檢驗樣品摻假、投毒或懷疑中毒的食物等,應(yīng)注意采樣的典型性原則。根據(jù)已掌握的情況有針對性地采樣。如懷疑某種食物可能是食物中毒的原因食品,或者感官上已初步判定出該食品存在衛(wèi)生質(zhì)量問題,而進行有針對性的選擇采樣。 ③當檢出陽性樣品或不合格樣品時,應(yīng)考慮采樣方法是否正確。必要時送實驗室進一步檢測。

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編輯:小檀20181010

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