答：請問你的細(xì)胞是如何混勻的？是滴管吹打還是振蕩培養(yǎng)板？如果是后者，而且是轉(zhuǎn)圈搖勻的話，很有可能由于離心力的作用使細(xì)胞甩到周邊部分，導(dǎo)致細(xì)胞中間少，四周多！自己可是試試！

周邊一般是相對會(huì)多一點(diǎn)，但是中間的數(shù)量也不會(huì)很少啊~~ 鋪板的時(shí)候我也沒有特異去振蕩培養(yǎng)板。

大概是板子的質(zhì)量問題吧或者是不是鋪板時(shí)候的細(xì)胞密度太低了？我用的corning的板 。

一個(gè)好辦法：在你培養(yǎng)種板之前，把培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱里進(jìn)行幾個(gè)小時(shí)的飽和后再取出，種入細(xì)胞時(shí)力量要輕，可采取用滴頭在培養(yǎng)板孔的側(cè)面慢慢加入讓細(xì)胞懸液流入板孔中，培養(yǎng)的細(xì)胞基本是均勻生長。記住千萬不要用振蕩器振蕩，否則你的細(xì)胞就會(huì)想你說得那樣聚積在一起。 

我今天把培養(yǎng)板放入培養(yǎng)箱里幾個(gè)小時(shí)，適當(dāng)?shù)陌鸭?xì)胞密度加大了一下，另外多加了一點(diǎn)培養(yǎng)液，今晚看細(xì)胞鋪的挺好的。

我認(rèn)為有兩種可能解決你問題的辦法:

1.加入前吹打均勻;

2.從多孔板側(cè)邊或底邊緩慢加入。

我在做原代培養(yǎng)時(shí)也遇到過這種情況，我一直以為培養(yǎng)皿鋪膠不均勻會(huì)導(dǎo)致這種現(xiàn)象，因?yàn)榛靹虻难芏渭尤氲脚囵B(yǎng)皿中時(shí)，在相差顯微鏡下血管段均勻分布在培養(yǎng)皿中，24h后貼壁的血管段就是周邊多，中間相對少些。下次我要試試hkqu戰(zhàn)友的方法看能否改變這種現(xiàn)象。謝謝指點(diǎn)！ 

這種現(xiàn)象很正常呀，不知你仔細(xì)觀察過沒有，孔直徑愈小，這個(gè)現(xiàn)象越明顯，我試過，24、96孔板這種現(xiàn)象不可避免，因?yàn)橐后w的附壁使得孔內(nèi)培養(yǎng)液不是成一個(gè)液平面，而是周邊高，就像凹鏡一樣，而使用這兩種孔板由于需要加干預(yù)等原因而不能加足量培養(yǎng)液，使得細(xì)胞隨培養(yǎng)液一起出現(xiàn)“邊集”現(xiàn)象，如果為了使孔中央也有均勻細(xì)胞而增加接種細(xì)胞數(shù)量的話，這要看你需要觀察何種指標(biāo)，如果是MTT ，免疫組化的話會(huì)因?yàn)榧?xì)胞成層而影響結(jié)果。

贊成hkqu戰(zhàn)友的建議，個(gè)人認(rèn)為消化細(xì)胞時(shí)要注意吹打均勻，避免細(xì)胞成團(tuán)，而且孔內(nèi)培養(yǎng)液量要足夠，我一般接種時(shí)加足量培養(yǎng)液，加干預(yù)時(shí)換一次液，干預(yù)液加培養(yǎng)液量等于接種時(shí)培養(yǎng)液量，這樣的話“邊集”現(xiàn)象會(huì)有所改觀，不妨一試。

我想我們做課題，實(shí)驗(yàn)的目的是為了驗(yàn)證或探索某些理論，而不是要所謂的“好看”，“美”。還記得魯迅的文章《藤野》一文嗎？我們很多年以前學(xué)過的，藤野對魯迅說得話大家不防重溫一下，我想這正是我們要學(xué)習(xí)的地方。

我做的是空斑形成實(shí)驗(yàn)，是細(xì)胞鋪成均勻的一層，昨天接種病毒時(shí)大部分孔都還好，個(gè)別的不太均勻。

現(xiàn)在我細(xì)胞實(shí)驗(yàn)也做了一段時(shí)間了，但在實(shí)驗(yàn)中平行組的差距還是比較大。

有時(shí)候一組數(shù)據(jù)大多是差不多的，偏偏會(huì)跳出一個(gè)相去甚遠(yuǎn)的數(shù)據(jù)。

我想應(yīng)該不是我細(xì)胞加入時(shí)的問題，因?yàn)槲业慕M間差距大是出現(xiàn)在加樣的組中，而對照組的數(shù)據(jù)卻相當(dāng)?shù)姆€(wěn)定。另外，我的樣品是*均勻的液體，照理應(yīng)該是不會(huì)出現(xiàn)上述問題的。 

我也出現(xiàn)了這樣的問題。我加入細(xì)胞的時(shí)候是用吸管邊吹打邊用一毫升的槍加入12孔板中的，可是組內(nèi)差異仍然很大，想請教一下大家加細(xì)胞的時(shí)候都有什么方法呀？ 

我覺得有幾點(diǎn)：

1.細(xì)胞消化后吹打成單細(xì)胞懸液很關(guān)鍵！保證分板時(shí)每個(gè)孔的細(xì)胞數(shù)目是一致的！

2.當(dāng)然還有你的處理因素各個(gè)孔之間的平行也很重要，比如說加藥時(shí)，藥物稀釋后混勻，保證每個(gè)孔的濃度是一致的！

3.再者加細(xì)胞和藥物時(shí)，要試驗(yàn)組和對照組一塊輪流加，避免加樣先后順序?qū)е录?xì)胞密度和藥物濃度的差異??！

吹打已經(jīng)是均勻了，但是鋪板，6孔，24孔總有些不均勻的哦，有點(diǎn)愛往中間集中。而且明明計(jì)數(shù)好了鋪了，長一兩天，各個(gè)孔密度就有點(diǎn)不一樣，對檢測有影響，能指教一下，有良策嗎？

1.如果用巴氏吸管鋪的話，每次吸取的量不要太多，因?yàn)槲軆?nèi)的細(xì)胞會(huì)自動(dòng)向下沉，往往*開始幾個(gè)孔細(xì)胞數(shù)多，經(jīng)常均勻細(xì)胞懸液，加液走S型路線。

2.如果用移液器的話，tips要處理下，把去掉避免損傷細(xì)胞，這樣每一次取液對應(yīng)一個(gè)孔。用tip一對一孔加入比較準(zhǔn)確。但也要注意混勻懸液。

3.設(shè)立平行組，n要足夠大（可以計(jì)算一下）。

4.鋪板后不要搖，因?yàn)閾u動(dòng)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞向中間聚集。鋪板一次搞定。 

鋪板后不要做圓周的晃動(dòng)，做十字晃動(dòng)，即上下左右晃動(dòng)，否則會(huì)使細(xì)胞旋到當(dāng)中去。 

移液器的槍頭沿著培養(yǎng)板壁加，就不會(huì)集中到中間了。