臺(tái)式電動(dòng)離心機(jī)的使用步驟和使用的注意事項(xiàng)
閱讀:1524 發(fā)布時(shí)間:2015-11-12
前者是沉降速度法,應(yīng)用該法時(shí)液體介質(zhì)的zui大密度要小于樣品中zui小顆粒的密度,離心時(shí)選用高轉(zhuǎn)速和短時(shí)間;后者是沉降平衡法,應(yīng)用該法時(shí)液體介質(zhì)的zui大密度要大于樣品中zui小顆粒的密度,離心時(shí)選用較低轉(zhuǎn)速和較長時(shí)間。實(shí)際操作有幾種形式:
1.差速離心這種方法是選擇不同轉(zhuǎn)速的離心,分別分離各個(gè)不同組分。例如先用低速沉降大顆粒和上清液,在高速離心上清沉降中等顆粒,zui后超速離心上清沉降小顆粒。采用逐級(jí)提高離心力分離上情液的方法,把不同大小的顆粒分開。
這種方法比較簡單,方便。分離的組份沉到管底,因此可以迅速濃縮所要的組份,減少體積。但回收率和純度是有矛盾的,要提高回收率,勢必提高轉(zhuǎn)速或延長離心時(shí)間,這樣大小相近的顆粒也會(huì)沉到管底。因此該法多用于粗提純或初步濃縮樣品。
2.速度區(qū)帶(或速度梯度)離心本法是將樣品放在一個(gè)連續(xù)的密度梯度液體上,通過離心,大顆粒沉降快,小顆粒沉降慢。經(jīng)過一段時(shí)間,相同的顆粒就在同一深度形成一條帶子,因此把各種組份分開來。它適用于分離密度相同、而大小不同的物質(zhì),如不同的蛋白質(zhì)組份密度都差不多,但分子量不一樣,用本法很容易將其分開。但對(duì)密度不同、大小類似的物質(zhì)則不易分離。蔗糖梯度是一種常用的介質(zhì)。用不同濃度的蔗糖溶液(5%-60%)配成梯度,用于梯度離心。再分別進(jìn)行收集處于不同區(qū)帶里的各個(gè)組份。
1.差速離心這種方法是選擇不同轉(zhuǎn)速的離心,分別分離各個(gè)不同組分。例如先用低速沉降大顆粒和上清液,在高速離心上清沉降中等顆粒,zui后超速離心上清沉降小顆粒。采用逐級(jí)提高離心力分離上情液的方法,把不同大小的顆粒分開。
這種方法比較簡單,方便。分離的組份沉到管底,因此可以迅速濃縮所要的組份,減少體積。但回收率和純度是有矛盾的,要提高回收率,勢必提高轉(zhuǎn)速或延長離心時(shí)間,這樣大小相近的顆粒也會(huì)沉到管底。因此該法多用于粗提純或初步濃縮樣品。
2.速度區(qū)帶(或速度梯度)離心本法是將樣品放在一個(gè)連續(xù)的密度梯度液體上,通過離心,大顆粒沉降快,小顆粒沉降慢。經(jīng)過一段時(shí)間,相同的顆粒就在同一深度形成一條帶子,因此把各種組份分開來。它適用于分離密度相同、而大小不同的物質(zhì),如不同的蛋白質(zhì)組份密度都差不多,但分子量不一樣,用本法很容易將其分開。但對(duì)密度不同、大小類似的物質(zhì)則不易分離。蔗糖梯度是一種常用的介質(zhì)。用不同濃度的蔗糖溶液(5%-60%)配成梯度,用于梯度離心。再分別進(jìn)行收集處于不同區(qū)帶里的各個(gè)組份。