東曹生命科學(xué)（Tosoh Bioscience）是色譜分離解決方案供應(yīng)商，近日宣布對(duì)現(xiàn)有SkillPak預(yù)裝柱產(chǎn)品線(xiàn)進(jìn)行了拓展，推出了2.5 cm I.D.和5.0 cm I.D.兩種規(guī)格的層析柱新品，用于單克隆抗體、抗體片段、ADC、寡核苷酸以及病毒等生物大分子的純化工藝開(kāi)發(fā)。

SkillPak預(yù)裝填有親和、陰/陽(yáng)離子交換、疏水以及尺寸排阻等各種分離模式的TOYOPEARL或TSKgel層析填料，性能優(yōu)異、穩(wěn)定可靠，可與常用的低壓或中壓液相色譜層析系統(tǒng)配合使用。SkillPak不僅可以重復(fù)再生使用，還充分考慮了每種填料不同的裝填壓縮比，能夠精確展示各種尺寸層析柱的純化效果。

公司現(xiàn)有產(chǎn)品1 mL和5 mL SkillPak主要用于純化工藝開(kāi)發(fā)或變更時(shí)進(jìn)行參數(shù)和方法的優(yōu)化，以及耐用性的測(cè)試等。此次新上市的50 mL和200 mL規(guī)格的層析柱可將開(kāi)發(fā)好的純化工藝線(xiàn)性放大。

1. 抗體純化工藝中洗脫pH值的確定

在mAb純化工藝中，找到適合mAb洗脫的緩沖溶液和pH值，可降低樣品中聚集體增加的風(fēng)險(xiǎn)。為了確定mAb結(jié)合和洗脫的條件，我們將含CHO細(xì)胞培養(yǎng)上清液的mAb進(jìn)樣至預(yù)裝有TOYOPEARL AF-rProtein A HC-650F填料的SkillPak層析柱中。

圖1. 使用1 mL和5 mL SkillPak確定mAb洗脫pH值

圖1中的A和B顯示了使用線(xiàn)性pH值梯度在pH 3.5時(shí)獲得尖銳的mAb組分峰 (洗脫大)。為了提高回收率，可選擇pH 3.3～3.5進(jìn)行分步洗脫。

2. 下游工藝的無(wú)縫放大

我們使用裝填了陰離子交換填料TOYOPEARL NH2-750F的不同尺寸的SkillPak層析柱分離蛋白標(biāo)準(zhǔn)品。

下圖中蛋白標(biāo)準(zhǔn)品的分離結(jié)果顯示，不同尺寸層析柱上其洗脫曲線(xiàn)相似，證明了SkillPak出色的放大能力。

圖2. 不同尺寸的SkillPak分離蛋白標(biāo)準(zhǔn)品

同時(shí)，我們還在5 mL、50 mL和200 mL的SkillPak層析柱上測(cè)定了牛血清白蛋白 (BSA) 的動(dòng)態(tài)吸附載量。BSA在不同尺寸的SkillPak上動(dòng)態(tài)吸附載量值非常接近，大偏差為4%，表明吸附能力與層析柱尺寸無(wú)關(guān)，這一點(diǎn)對(duì)于工藝放大時(shí)的上樣量來(lái)說(shuō)非常重要。

表1. 不同尺寸SkillPak上BSA的動(dòng)態(tài)吸附載量