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MACS技術(shù)原理及分選實(shí)驗(yàn)步驟和策略
最近更新時(shí)間：2013-7-25
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大小：11.3KB
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MACS技術(shù)原理
MACS技術(shù)為德國(guó)美天旎生物技術(shù)有限公司（Miltenyi Biotec GmbH）的產(chǎn)品，是一種集合了免疫學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、磁力學(xué)等知識(shí)于一體的高度特異性細(xì)胞分選技術(shù)，其高度特異性來(lái)自抗體對(duì)抗原的特異性識(shí)別。主要組成成分為MACS微珠、MACS分選柱和MACS分選器。MACS微珠是與高度特異性單克隆抗體相偶聯(lián)的超順磁化微粒。MACS分選柱置于一個(gè)*性磁場(chǎng)—MACS分選器中，可以將磁力增強(qiáng)1000倍，足以滯留僅標(biāo)記極少量微珠的目的細(xì)胞。用緩沖液沖洗分選柱，所有未標(biāo)記的細(xì)胞被沖洗掉。分選柱離開(kāi)磁場(chǎng)，即可獲得被標(biāo)記的細(xì)胞組分。所有的操作在2.5-30分鐘內(nèi)即可完成，得到的細(xì)胞可立即用于后繼實(shí)驗(yàn)。
MACS技術(shù)優(yōu)點(diǎn)
1、穩(wěn)定、高質(zhì)量的分選
使用MACS技術(shù)，可獲得高純度（90-99%）、高回收率的分選細(xì)胞群。
2、對(duì)細(xì)胞無(wú)損傷
50nm微珠和MACS分選柱均無(wú)毒性，對(duì)細(xì)胞無(wú)損傷，可以純化有活力和功能活性的細(xì)胞而不影響其活性。
3、操作簡(jiǎn)便、快速
MACS技術(shù)操作簡(jiǎn)單，消毒方便。磁珠孵育時(shí)間很短，僅需15分鐘。手動(dòng)分選可在30分鐘內(nèi)完成，autoMACS分選可在2.5-10分鐘之內(nèi)完成。
4、從實(shí)驗(yàn)室到臨床
MACS技術(shù)可以實(shí)現(xiàn)從105到1011個(gè)細(xì)胞分選。如果使用頻率高，可選用autoMACS;密閉系統(tǒng)內(nèi)無(wú)菌分選細(xì)胞，可選用CliniMACS。
5、分選后細(xì)胞適用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)
流式細(xì)胞術(shù)、顯微鏡分析和分子生物學(xué)研究顯示MACS分選對(duì)細(xì)胞沒(méi)有任何影響。分選后細(xì)胞適用于細(xì)胞培養(yǎng)和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)。此外，分選得到的標(biāo)記和未標(biāo)記細(xì)胞組分均可回收利用。
6、從細(xì)胞到分子分選
MACS技術(shù)不僅可以分選各種細(xì)胞，還可以分選轉(zhuǎn)染細(xì)胞、亞細(xì)胞物質(zhì)、蛋白質(zhì)、DNA、RNA及mRNA。
MACS標(biāo)記策略
應(yīng)用MACS技術(shù)進(jìn)行磁性細(xì)胞分選zui重要的一點(diǎn)是高質(zhì)量的標(biāo)記。要盡可能地增強(qiáng)陽(yáng)性細(xì)胞的標(biāo)記，并減弱背景染色。有兩種基本的磁性標(biāo)記方式：直接標(biāo)記和間接標(biāo)記。
1、直接磁性細(xì)胞標(biāo)記（Direct magnetic cell labeling）
直接標(biāo)記是zui快速、zui特異的磁性標(biāo)記方法。目前有多種分選人、小鼠、大鼠以及非人類靈長(zhǎng)類細(xì)胞的MACS直標(biāo)微珠可供選用。
2、間接磁性細(xì)胞標(biāo)記（Indirect magnetic cell labeling）
間接磁性細(xì)胞標(biāo)記需要聯(lián)合使用單克隆或者多克隆抗體和MACS間標(biāo)微珠。未結(jié)合抗體、生物素化抗體或者熒光素標(biāo)記抗體均可作為一抗標(biāo)記細(xì)胞，再使用抗免疫球蛋白微珠、抗生物素或鏈霉親和素微珠、抗熒光素微珠作為二抗磁性標(biāo)記細(xì)胞。
幾乎針對(duì)任何種系任何細(xì)胞的任何一種單抗或多抗，均可用于間接標(biāo)記。間接標(biāo)記主要在如下情況時(shí)選用：當(dāng)沒(méi)有直標(biāo)磁珠時(shí);需要用幾種抗體的混合物同時(shí)分選或去除多種類型的細(xì)胞;間接標(biāo)記有放大作用，因此可在磁性分選抗原表達(dá)弱的目的細(xì)胞時(shí)使用;使用自備抗體或者配體的磁珠分選中。
MACS分選策略
有兩種基本的分選策略：陽(yáng)性分選和去除分選。復(fù)合分選策略是將兩種基本分選策略相結(jié)合或者聯(lián)合使用多選微珠，從而實(shí)現(xiàn)細(xì)胞亞群的分選。
1、陽(yáng)性分選策略（Positive selection strategy）
陽(yáng)性分選中，目的細(xì)胞被磁性標(biāo)記后，作為陽(yáng)性標(biāo)記組分直接分選出來(lái)。分選后的細(xì)胞不必去除MACS微珠，可立即用于培養(yǎng)或者后續(xù)操作。該方法可以將磁性標(biāo)記的靶細(xì)胞富集10000倍。陽(yáng)性分選策略優(yōu)點(diǎn)：純度高，回收率高，操作迅速、簡(jiǎn)便。
2、去除分選策略（Depletion strategy）
去除分選是把非目的細(xì)胞磁性標(biāo)記后從細(xì)胞混合物中去除的方法，即未磁性標(biāo)記的細(xì)胞為目的細(xì)胞。MACS分選柱技術(shù)加上強(qiáng)磁性標(biāo)記可以去除高達(dá)4個(gè)對(duì)數(shù)級(jí)的細(xì)胞。去除分選策略適用范圍：去除不需要的細(xì)胞;缺乏針對(duì)目的細(xì)胞的特異性抗體（如腫瘤細(xì)胞）;不需要抗體和目的細(xì)胞結(jié)合，即細(xì)胞不被激惹（如T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞功能分析）;復(fù)合分選的一部分。
3、復(fù)合分選策略：
聯(lián)合使用兩種以上分選策略，主要用于細(xì)胞亞群的分選或者得到高純度非常稀有的細(xì)胞。
（1）去除后再陽(yáng)性分選（Depletion followed by positive selection）
細(xì)胞亞群的分選，可以先磁性標(biāo)記非目的細(xì)胞，去除分選后對(duì)陰性組分再行磁性標(biāo)記和陽(yáng)性分選。適用范圍：在細(xì)胞懸液中，非目的細(xì)胞也表達(dá)用來(lái)陽(yáng)性選擇目的細(xì)胞的抗原，就需要先去除這群非目的細(xì)胞;如果要分選非常稀有細(xì)胞，先從細(xì)胞懸液中去除非目的細(xì)胞，在富集細(xì)胞的基礎(chǔ)上，進(jìn)行陽(yáng)性分選，可獲得高純度目的細(xì)胞。
（2）多重分選策略（MultiSort Strategy）
MACS多重分選是一種根據(jù)多種表面標(biāo)志磁性分選細(xì)胞的技術(shù)。多重分選中，首先用MACS多選微珠標(biāo)記目的細(xì)胞，進(jìn)行*參數(shù)陽(yáng)性分選。然后細(xì)胞與多選解離試劑共同孵育，后者可以將微珠從抗體上酶性解離下來(lái)。接著使用針對(duì)另一細(xì)胞表面標(biāo)志的抗體-微珠復(fù)合物磁性標(biāo)記陽(yáng)性分選細(xì)胞。二次標(biāo)記的細(xì)胞可以再次進(jìn)行陽(yáng)性分選或者去除分選。
