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酶聯(lián)免疫實(shí)驗(yàn)中緩沖溶液等試劑的配置
最近更新時(shí)間：2013-7-30
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ELISA實(shí)驗(yàn)中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)，ELISA試劑以及各種溶液如何配置?zui近剛做了下ELISA實(shí)驗(yàn)，把各種ELISA配置方法匯總?cè)缦拢海?） ELISA實(shí)驗(yàn)包被緩沖液（2） ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液（2） ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液（3） ELISA實(shí)驗(yàn)稀釋液;（4）ELISA實(shí)驗(yàn)終止液（5）ELISA底物緩沖液（6）ELISA實(shí)驗(yàn)TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液（7） ELISA實(shí)驗(yàn)ABTS使用液（8）ELISC。
試劑
（1） ELISA實(shí)驗(yàn)包被緩沖液（PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液）:
NaHCO3 1.59克
NaHCO3 2.93克
加蒸餾水至1000ml
（2） ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液（PH7.4 PBS）：0.15M
KH2PO4 0.2克
Na2HPO4·12H2O 2.9克
NaCl 8.0克
KCl 0.2克
Tween-20 0.05% 0.5ml
加蒸餾水至1000ml
（3） ELISA實(shí)驗(yàn)稀釋液：
牛血清白蛋白（BSA） 0.1克
加洗滌緩沖液至100ml
或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。
（4） ELISA實(shí)驗(yàn)終止液（2M H2SO4）：
蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸（98%）21.7ml。
（5） ELISA底物緩沖液（PH5.0磷酸棗檸檬酸）:
0.2M Na2HPO4（28.4克/L） 25.7ml
0.1M 檸檬酸（19.2克/L） 24.3ml
加蒸餾水50ml。
（6） ELISA實(shí)驗(yàn)TMB（四甲基聯(lián)苯胺）使用液:
TMB（10mg/5ml無(wú)水乙醇） 0.5ml
底物緩沖液（PH5.5） 10ml
0.75%H2O2 32μl
（7） ELISA實(shí)驗(yàn)ABTS使用液:
ABTS 0.5mg
底物緩沖液（PH5.5） 1ml
3%H2O2 2μl
（8）ELISA實(shí)驗(yàn)封閉液：
牛血清白蛋白（BSA） 5克
加洗滌緩沖液至100ml。
值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉，不適合長(zhǎng)期保存。
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為了保證ELISA實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)操作中加入的緩沖液和各組分一定要，將洗滌液加入酶標(biāo)板中的時(shí)候防止加入的試劑混入另外一個(gè)酶標(biāo)孔，嚴(yán)防交叉污染。