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士鋒生物蛋白A—膠體金（PAg）復(fù)合物的制備方法
最近更新時(shí)間：2013-8-7
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大?。?/span>11.3KB
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蛋白A—金（PAg）復(fù)合物的制備（Slot 和Geuze,1981），主要包含以下四個(gè)步驟膠體金液的制備、待標(biāo)記蛋白質(zhì)和金溶液的準(zhǔn)備、確定膠體金與蛋白A的結(jié)合用量比例、膠體金與蛋白A的結(jié)合和純化。
（1）膠體金液的制備，應(yīng)用枸椽酸三鈉還原法（見還原法制備膠體金的五種方法）。
（2）待標(biāo)記蛋白質(zhì)和金溶液的準(zhǔn)備，同前。注意點(diǎn)是用0.2mol/l K2CO3將金溶液pH調(diào)至5.9～6.2之間。
（3）確定膠體金與蛋白A的結(jié)合用量比例。取一系列盛有0.1ml膠體金液的小玻璃管，分別加入不同量的蛋白A，5min后，再各加0.25ml 10%的NaCl。如加入的蛋白A濃度不夠，不能穩(wěn)住金粒，在電解質(zhì)NaCl的影響下，金粒聚合沉淀，溶液由紅變藍(lán)。選擇能防止溶液由紅變藍(lán)的zui低濃度的蛋白A的量作為兩者的結(jié)合比例。以枸椽酸鈉法制成的膠體金每毫升約需要5μg蛋白A來結(jié)合，方能保證其穩(wěn)定性。
（4）膠體金與蛋白A的結(jié)合和純化，依上法測得所需的比例超過10%，即每30ml膠體中加入2mg蛋白A，5min后，加入0.3ml PEG作為穩(wěn)定劑，然后以15000r/min離心45min（不同方法制備的金離心速度不同），略帶紅色的松散的復(fù)合物沉淀即為PAg復(fù)合物。小心棄去上清液，加入PBS沖洗，如上，松散的PAg復(fù)合物置于PBS溶液中，按0.2mg/ml的比例加入聚乙二醇作為穩(wěn)定劑，保存于硅化的玻璃器皿中備用，也有主張將上述PAg復(fù)合物放入3～6ml 5%甘油—0.05%聚乙二醇—0.02%疊氮鈉混合液中，再離心，棄去無色上清液后，收取管底部濃縮純化的PAg復(fù)合物置4℃保存。
據(jù)文獻(xiàn)報(bào)告，此PAg復(fù)合物的原液在4℃可保存達(dá)一年之久。