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士鋒生物BSA使用技巧討論
最近更新時間：2013-9-1
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大小：14.3KB
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1、BSA牛血清白蛋白在PCR中的作用是什么?它的作用機(jī)理是什么?
BSA will coat the tube walls, preventing the template from being absorbed. This will reduce the frequency of primer dimers that occurs when the template concentration is low. BSA is also used to reduce the inhibition caused by humic acid contaminants.
2、Elisa中的blocking buffer 、tween、BSA等問題
請問tween是降低非特異性binding的嗎? 如果blockingbuffer中加入了0.05%的tween，會不會把之前coating上的蛋白也給洗掉了?
一抗和二抗的稀釋液有什么要求? 里面的BSA濃度過高（比如3%）會不會影響特異性識別?
Tween-20有復(fù)性抗原的作用，可提高特異性的識別能力。在做westen blot時，用惰性蛋白質(zhì)或非離子去污劑封閉膜上的未結(jié)合位點(diǎn)可以降低抗體的非特異性結(jié)合。封閉劑應(yīng)該封閉所有未結(jié)合位點(diǎn)而不替換膜上的靶蛋白、不結(jié)合靶蛋白的標(biāo)委、也不與抗體或檢測試劑有交叉反應(yīng)。zui常見的封閉劑是BSA、脫脂奶粉、酪蛋白、明膠和Tween-20（0.05 - 0.1%）稀溶液。
一抗的稀釋看你試驗(yàn)的要求了。二抗你說的是酶標(biāo)抗體吧，這個要稀釋到工作濃度，后面的顯色效果才是*的!
BSA主要是封閉液中用到，其實(shí)作用顯而易見是起到封閉效果，就是結(jié)合包被過程中未結(jié)合的結(jié)合位點(diǎn)，提高ELISA中的特異性結(jié)合，提高實(shí)驗(yàn)的度。一般濃度是1%-2%
3、牛血清白蛋白BSA的等電點(diǎn)是多少
天然牛血清白蛋白（BSA）的等電點(diǎn)為4.6~5.8，經(jīng)無水乙二胺（EDA）和碳化二亞胺（EDC）反應(yīng)，改性后的BSA等電點(diǎn)為8.6。
4、牛血清蛋白（BSA），牛血清蛋白（第五組分）之間有什么區(qū)別?
“第五組分” 是 牛血清蛋白的一個級別。
牛血清蛋白等級 從低到高 ：
牛血清白蛋白，
牛血清白蛋白第五組分，
牛血清白蛋白（無必須脂肪酸），
牛血清白蛋白（無蛋白酶），
牛血清白蛋白（細(xì)胞培養(yǎng)級），
金標(biāo)級牛血清白蛋白，
交聯(lián)牛血清白蛋白
就是說 越往后的 蛋白 品質(zhì)越高，當(dāng)然價錢也越貴。
你說的牛血清蛋白（BSA）中的BSA 就是“牛血清蛋白”的英文縮寫簡稱。 BSA 不是一種型號。
5、BSA的變性溫度
牛血清白蛋白的話,大概是60～72℃.
6、WB轉(zhuǎn)膜后清晰看到Marker在膜上，再用5%的BSA封閉，一抗過，二抗室溫一個小時，顯影定影后膠片一片空白?
以前也出現(xiàn)過這種情況，問題不清楚，因?yàn)檫@里的太多可能出錯的地方了
1）就像你說的抗體濃度問題，不過我覺得這里問題不是太大
2）你檢測的東西的濃度問題，如果表達(dá)很低的話，曝光時間久要長了，但是你顯影之后一點(diǎn)都沒有的話，就有問題了。
3）ecl反應(yīng)液有沒問題?
4）曝光的時候的那張膜與膠片之間有沒壓緊?
做WB的時候是有正負(fù)對照，現(xiàn)在的有曝光的Marker，你可以買點(diǎn)試試~
7、小牛血清和BSA的區(qū)別?
小牛血清是CSA 胎牛血清是BSA 者因胎牛未與母體外環(huán)境接觸，二者中促生長因子，粘附因子及激素含量不一，后者使用效果更好些且貴很多。我養(yǎng)用BSA的細(xì)胞生長速度比用CSA快5倍以上
8、本人是做膠體金試劑的，現(xiàn)在發(fā)現(xiàn)一個較怪的現(xiàn)象。我現(xiàn)在做產(chǎn)品是用于全血檢測的，需配稀釋液?，F(xiàn)在的現(xiàn)象是，檢測稀釋液時，條是沒有假陽的。但加入陽性標(biāo)準(zhǔn)品時，再用稀釋液沖，結(jié)果顯帶很深。與真實(shí)的結(jié)果有很大的區(qū)別。我的稀釋液是PB+BSA，后來去掉BSA后，顯帶很淺。這是為什么呢?BSA怎的會出現(xiàn)假象呢?希望大家討論指點(diǎn)。
呵呵，你是萬浮的吧!估計(jì)你用了多抗吧，可能這多抗質(zhì)量不怎么的，做多抗時疫苗不純，有BSA成分，導(dǎo)致分離出的抗體里有抗BSA抗體或類似能與BSA成分發(fā)生交叉反應(yīng)的抗體。換個抗體試試。我們剛好也做原料，這情況以前碰到過。
1.BSA不純，含雜質(zhì);
2.T line包被抗體和金標(biāo)抗體對BSA的親和性強(qiáng)。
3.樣品稀釋液里的鹽離子或pH的影響造成了BSA與包被抗體和金標(biāo)抗體親和性強(qiáng)。
8、本人前日在查閱ELISA相關(guān)試劑配制時發(fā)現(xiàn),一般封閉用BSA濃度為0.5%或1%,這是常用劑量,可是具體配制時卻發(fā)現(xiàn):《生物化學(xué)儀器分析與實(shí)驗(yàn)技術(shù)》一書：封閉液（含1%BSA）：10mlPBS中加100mgBSA?！秾?shí)用分子生物學(xué)操作指南》：BSA0.1g加洗滌液至100ml。如此濃度我已經(jīng)糊涂了，請高手指點(diǎn)。
做流式細(xì)胞儀的BSA濃度為0.5-1％；ELISA等用2-4%。 1%BSA應(yīng)該是100ml溶液里面含有1克的BSA.所以10mlPBS中加100mgBSA是對的.