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士鋒生物土壤中稀有放線菌的分離、純化和鑒別
最近更新時(shí)間：2013-9-25
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大小：14.3KB
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一、目的和要求
1、了解采集土樣的要求和方法。
2、掌握由土壤中分離稀有放線菌的基本原理和操作技術(shù)。
3、學(xué)習(xí)并掌握土壤稀釋法和微生物的純培養(yǎng)技術(shù)。
4、學(xué)習(xí)并掌握抗生菌的鑒別方法。
二、原理
篩選放線菌是新抗研究的重要課題之一。迄今為止，已發(fā)現(xiàn)的抗生素有80%皆來自于放線菌。放線菌主要存在于土壤中，并在土壤中占有相當(dāng)大的比例。一般地，放線菌在比較干燥、偏堿性、含有機(jī)質(zhì)豐富的土壤中數(shù)量居多。通常，隨著地理分布、植被及土壤性質(zhì)的不同，放線菌的種類、數(shù)量和拮抗性也各不相同。土壤是微生物的大本營，其中的放線菌多以鏈霉菌為主，因此人們通常將除鏈霉菌以外的其它放線菌統(tǒng)稱為稀有放線菌。若以常規(guī)方法進(jìn)行分離，得到的幾乎全部是鏈霉菌。然而，當(dāng)采用加熱處理土樣、選用特殊培養(yǎng)基或添加某種抗生素等方法時(shí)，均可提高稀有放線菌的獲得率。由土壤中分離放線菌的方法很多，其中包括稀釋法、彈土法、混土法和噴土法等，本實(shí)驗(yàn)主要采用稀釋法，并通過選用特殊培養(yǎng)基的方法，來獲得少量稀有放線菌。
由土壤中分出的放線菌需進(jìn)一步鑒別是否為需要的抗生菌。首先應(yīng)根據(jù)篩選目的確定試驗(yàn)?zāi)Ｐ停缓罄门囵B(yǎng)基平板進(jìn)行拮抗性測定。常用的方法有瓊脂塊法和濾紙片法。其主要依據(jù)是擴(kuò)散原理，即觀察在抗生菌周圍是否會出現(xiàn)明顯的抑菌圈。抑菌圈的大小和透明度則表明了該菌株抗菌活性的強(qiáng)弱。本實(shí)驗(yàn)選用了這兩種方法。
三、實(shí)驗(yàn)材料
1、培養(yǎng)基：葡萄糖天門冬素瓊脂，精氨酸瓊脂，高氏1號瓊脂，以上每種培養(yǎng)基皆用500ml三角瓶分裝250ml。
2、滅菌物品：牛皮紙袋，培養(yǎng)皿，1ml、5ml吸管，250ml三角瓶分裝90ml無菌水（含30粒玻璃珠），18×180mm試管分裝9ml無菌水，牙簽，玻璃刮鏟，18×180mm試管中分裝10 ml 1‰K2Cr2O7母液。
3、試驗(yàn)菌：
?。?）枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）
?。?）大腸桿菌（Escherichia coli）
?。?）金黃色葡萄球菌（Staphlococcus aureus）
?。?）深紅酵母（Ruodotorula rubra）
4、其它：采土鏟，細(xì)目篩，藥勺，稱量紙，試管架，小天平，記號筆，打孔器，游標(biāo)卡尺、鑷子，圓濾紙片，15×150mm試管分裝5ml無菌水，1ml吸管，無菌漏斗。
四、實(shí)驗(yàn)實(shí)施
五、結(jié)果及分析