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士鋒生物教您如何快速鑒定轉(zhuǎn)化子DNA
最近更新時(shí)間：2013-10-14
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大?。?/span>14.3KB
文件類型：JPG 圖片下載次數(shù)：129次
資料類型：未知文件瀏覽次數(shù)：587次
快速細(xì)胞破碎法實(shí)驗(yàn)步驟
1、挑取轉(zhuǎn)化平板上的單菌接種于含相應(yīng)抗生素的2ml LB中,37℃振蕩培養(yǎng)至A590值為0.6～0.8.
2、取1ml菌液至1.5ml eppendorf管中,9000rpm離心9min,去盡上清.
3、加入70μl Cracking Gel緩沖液[1mol/L Tris –HCl（pH6.8）10ml,20%SDS 10ml, 250mmol/L EDTA 1.6ml,蔗糖27.2g, 1.2%溴酚藍(lán)1.67ml,加雙蒸水至200ml],混勻后,37℃水浴30min以上.
4、15000rpm離心15min.
5、吸取上清點(diǎn)樣電泳,觀察.
轉(zhuǎn)化子DNA的酶切鑒定
上海士鋒生物教您如何進(jìn)行轉(zhuǎn)化子DNA的快速少量抽提
1） 菌液移至5ml Eppendorf 管中,9000rpm,離心9min,去上清.
2） 加溶液Ⅰ100μl,溶液Ⅱ200μl,溶液Ⅲ150μl,混勻,冰浴10min.
3） 15000rpm離心15min.
4） 吸取上清,加入異丙醇1ml混勻,置室溫15～30min.
5） 15000rpm離心15min,棄上清,加入75%乙醇洗滌2次.
6） 離心棄上清,真空抽干,加入適量1×TE溶解DNA.
7） 取少量DNA電泳,觀察濃度.