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士鋒生物蛙類離體心臟灌流實驗步驟介紹
最近更新時間：2013-11-3
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大小：37KB
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肌具有自動節(jié)律性收縮的特性，可以用人工灌流的方法研究心臟活動的規(guī)律及特點；還可以觀察灌流液成分的改變對離體心臟活動的影響。制備離體蛙心，插管進行人工灌流，改變灌流液的成分，記錄心臟波動曲線，可以分析不同灌流液對于蛙心臟活動的影響。
【關鍵詞】 灌流
【Abstract】
Cardiac muscle has auto-rhythmicity. We can use the perfusion to study its regulation and features and analyze the effect of different. By changing the ingredients of the perfusion lIQuid and recording the heart fluctuating curve, we can analyze the different effects of different perfusion liquid.
【Key Words】Perfusion
【前言】
對離體的蛙類心臟進行灌流，學習斯氏離體蛙心灌流法。觀察Na+、Ca2+、腎上腺素（Adr）、乙酰膽堿（ACh）等對離體心臟活動的影響，分析心肌的生理特性。
【動物與器材】
蟾蜍或蛙、常用手術器械、蛙板（或蠟盤）、蛙心夾、計算機采集系統(tǒng)、張力傳感器、支架、雙凹夾、雙針形露絲刺激電極、滴管、培養(yǎng)皿（或小燒杯）、紗布、棉線、橡皮泥、任氏液。蛙心套管（斯氏套管或八木氏套管）、套管夾、0．65％NaCl、5％NaCI、2％CaCl2、1％KCl、1：5 000腎上腺素、1：10 000乙酰肌堿、300U／mL肝素。
【方法、步驟與實驗結(jié)果】
1．儀器準備
打開計算機采集系統(tǒng)，接通張力傳感器輸入通道。從顯示器的“設置”菜單，彈出“設計實驗標記”對話框，選擇“蛙心灌流”后，再從“實驗項目”的“循環(huán)實驗”中，選定“蛙心灌流”實驗（用以標記實驗）。所用儀器若無此設置，可以用通用標記作實驗標記。
2．離體蛙心的制備
采用斯氏蛙心插管法。
取一只蛙或蟾蜍，雙毀髓后背位置于蠟盤中，按前面的方法暴露心臟。仔細識別心臟周圍的大血管（見右圖）。在左主動脈下方穿一線，于動脈圓錐處結(jié)扎（動物個體小時，結(jié)扎位置可靠上些）。再從左右兩主動脈下方穿一線，并打一活結(jié)備用。左手提起主動脈上的結(jié)扎線，右手用眼科剪在結(jié)扎線下方、沿向心方向?qū)用}上壁剪一斜口。選擇大小適宜的蛙心套管，然后將盛有少量（套管內(nèi)2～3 cm高度）任氏液（內(nèi)加入一滴肝素溶液）的斯氏蛙心套管，山開口處插入動脈圓錐（圖見下頁）。當套管到達動脈圓錐基部時，應將套管稍稍后退，使向動脈圓錐的背部后下方及心尖方向推進，經(jīng)主動脈瓣插入心室腔內(nèi)（于心室收縮時插入，但不可插得過深，以免心室壁堵住套管下口）。此時可見套管中血液沖人套管，并使液面隨心臟搏動而亡下移動，表明操作成功（否則需退回并重新插入）。用滴管吸去套管中的血液，更換新鮮任氏液。穩(wěn)定住套管后，輕輕提起備用線，將左、右主動脈連同插入的套管※用雙結(jié)扎緊（不得漏液），再將結(jié)線固定在套管的小玻璃鉤上，然后剪斷結(jié)扎線上方的血管。輕輕提起套管和心臟，看清靜脈竇的位置，于靜脈竇下方剪斷有牽連的組織，僅保留靜脈竇與心臟的，使心臟離體（切勿損傷靜脈竇）。用任氏液反復沖洗心室內(nèi)余血，使套管內(nèi)灌流液不再有殘留血液。保持套管內(nèi)液面高度一致（1.5～2 cm），即可進行實驗。
3．將插好離體心臟的套管固定在支架上，用蛙心夾夾住少許心尖部肌肉 （不可夾得過多，以免因夾破心室而漏液）。再將蛙心夾上的系線繞過一個滑輪與張力傳感器相連。注意：勿使灌流液滴到傳感器上。調(diào)節(jié)顯示器上心臟收縮曲線的幅度適中。
4．實驗觀察
（1）記錄正常心搏曲線
（2）改用0．65％NaCI溶液灌流，并作好加藥標記，觀察心搏變化。待曲線 氏插管裝置出現(xiàn)明顯變化時，立即吸去套管中的灌流液，同時做好沖洗標記，并用新鮮任氏液清洗2—3次，待心搏恢復正常。注意：換液時切勿碰套管，以免影響描記曲線的基線，同時保持灌流液面一致（以下同）。
觀察可得，NaCI溶液會阻遏心臟搏動。
（3）向套管內(nèi)加2～6滴5％NaCI（較細的套管需少加）溶液，作好加藥記號，觀察心搏曲線的頻率及振幅變化。當曲線出現(xiàn)明顯變化時，應立即吸去套管中的灌流液，并做好沖洗標※記，迅速用新鮮任氏液清洗2～3次，待心搏恢復正常。
（4）同法向套管內(nèi)加入1～3滴2％CaCI：溶液，觀察并記錄心搏曲線的變化。當出現(xiàn)明顯變化時，立即更換任氏液，待心搏恢復正常（如果恢復遲緩，可多次沖洗）。
（5）向套管中加1—2滴1％KCl溶液，記錄心搏曲線的變化。當心搏曲線變化時，同法更換灌流液，待心搏恢復正常。