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動(dòng)物組織或材料中鹽酸克倫特羅殘留的快速ELISA檢測(cè)
最近更新時(shí)間：2013-11-25
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大?。?/span>14.3KB
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簡(jiǎn)介：
克倫特羅（Clenbuterol）屬于beta興奮劑，是一種高選擇性的興奮劑和激素，具有水解脂肪、合成代謝和對(duì)非條紋肌肉組織的松弛作用。進(jìn)年來被一些人非法添加到飼料中以提高脂肪型動(dòng)物的瘦肉率和加速動(dòng)物的生長(zhǎng)。當(dāng)用作生長(zhǎng)調(diào)節(jié)劑時(shí)，其添加量是治療量的5—10倍，常在動(dòng)物體內(nèi)殘留而給消費(fèi)者帶來危害。
通常，HPLC或gc-ms是克倫特羅殘留檢測(cè)的確證方法，但是其前處理步驟費(fèi)用昂貴，而ELISA快速檢測(cè)試劑盒因成本低、操作簡(jiǎn)便、速度快、一次檢測(cè)樣本量大、儀器化低，現(xiàn)已成為常規(guī)的篩選方法。
1.檢測(cè)原理：
測(cè)定的基礎(chǔ)是抗原抗體反應(yīng)。微孔板上包被有針對(duì)兔IgG（Clenbuterol抗體）的羊抗體，含有克倫特羅抗原的樣品或標(biāo)準(zhǔn)品與酶標(biāo)記物被加入到小孔中，經(jīng)過孵育及洗滌步驟后，游離的抗原與抗原酶標(biāo)記物競(jìng)爭(zhēng)抗體結(jié)合位點(diǎn)，沒有結(jié)合的抗原酶標(biāo)記物在清洗步驟中被除去，將顯色液加入到孔中并且孵育，結(jié)合的酶標(biāo)記物將無色的發(fā)色劑轉(zhuǎn)化為藍(lán)色的產(chǎn)物。加入反應(yīng)停止液后使顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)為黃色。在450nm處測(cè)量，吸光強(qiáng)度與樣品的克倫特羅濃度成反比。
2.操作時(shí)間：1小時(shí)（30分鐘孵育+30分鐘顯色）
3.檢測(cè)下限：0.1ppb
4.回收率：
尿樣和血清： 97-110%
飼料： 95-100%
肝臟/組織： 90-97%
牛奶及奶粉 100%
5.交叉反應(yīng)率：
Clenbuterol （克倫特羅） 100%
Mabuterol（馬普特羅） 100%
Mapenterol（馬噴特羅） 100%
Salbutamal （沙丁胺醇） 8-9%
Terbutalin （特普他林） 7-8%
Simarterol（塞曼特羅） <0.1%
Isoproterenol（異丙腎上腺素） <0.1%
Fenoterol（非諾特羅） <0.1%
6.試劑盒的組成：
1） 96孔酶標(biāo)板：12條╳8孔（包被有抗兔IgG）.
2） 克倫特羅標(biāo)準(zhǔn)液6瓶：1ml /瓶，為Clenbuterol水溶液:0.1ng/ml，0.3 ng/ml，0.6 ng/ml，1.25 ng/ml，2.5 ng/ml，5 ng/ml.
3）酶聯(lián)結(jié)合物Conjugate peroxidase： 6ml 黃蓋
4） 抗Clenbuterol抗體溶液：Anti-clenbuterol antibody 11ml 紅蓋
5） 沖洗液（需10倍稀釋）Wash buffer： 50ml 塑料瓶
6） 檸檬酸鹽緩沖液Citrate buffer： 25ml 藍(lán)蓋
7）底物溶液Chromogen： 3 ml 黑蓋
8）樣品稀釋液（需20倍稀釋）Diluent solution: 10ml 綠蓋
9）反應(yīng)終止液Stop solution： 6ml 白蓋