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士鋒生物沉淀反應(yīng)（Precipitation）實驗步驟分析
最近更新時間：2013-11-27
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大小：37KB
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可溶性抗原與相應(yīng)的抗體混合，在電解質(zhì)存在的條件下，兩者比例適合，即可有沉淀物出現(xiàn)，叫沉淀反應(yīng)（Precipitation）.由于沉淀反應(yīng)抗原多系膠體溶液。沉淀物主要是由抗體蛋白所組成。
為了求得抗原與抗體的適宜比例，保證有足夠的抗體，而且抗原分子小，具有較大的反應(yīng)面積，因此操作上通常是稀釋抗原，不稀釋抗體。
沉淀反應(yīng)的種類有環(huán)狀沉淀、絮狀沉淀、莢膜膨脹、瓊脂擴(kuò)散及免疫電泳等。此外還有放射性同位素標(biāo)記、酶標(biāo)記等測定法。
（一）環(huán)狀沉淀反應(yīng)
當(dāng)抗原與相應(yīng)抗體形成一個接觸面時，如二者比例適當(dāng)，接觸面上可形成一個乳白色的環(huán)狀物即為陽性沉淀反應(yīng)。
材料：
1.免疫血清：免疫兔抗人血清
2.抗原：人血清
3.小沉淀管、毛細(xì)吸管、橡皮頭、生理鹽水。
方法：
1.取小沉淀管2只，以毛細(xì)吸管吸取抗人血清約0.2毫升，加入*管，加時注意不能有氣泡。
2.以毛細(xì)吸管吸取生理鹽水0.2毫升加入第二管。
3.用毛細(xì)吸管吸入血稀釋0.2毫升加入各管，加時應(yīng)注意使抗原溶液緩緩由管壁流下，輕浮于血清面上，使成一明顯界面，切勿使之相混。
4.置室溫中10—20分鐘，觀察液面有無乳白色沉淀環(huán)，若有則為陽性。
（二）.瓊脂擴(kuò)散試驗
瓊脂擴(kuò)散是抗原抗體在凝膠中所呈現(xiàn)的一種沉淀反應(yīng)。
抗體在含有電解質(zhì)的瓊脂凝膠中相遇時，便出現(xiàn)可見的白色沉淀線。這種沉淀線是一組抗原抗體的特異性復(fù)合物。如果凝膠中有多種不同抗原抗體存在時，便依各自擴(kuò)散速度的差異，在適當(dāng)部位形成獨立的沉淀線，因此廣泛地用于抗原成分的分析。瓊脂擴(kuò)散試驗可根據(jù)抗原抗體反應(yīng)的方式和特性分為單向免疫擴(kuò)散、雙向免疫擴(kuò)散、免疫電泳、對流免疫電泳、單向及雙向火箭電泳試驗。
（1）單向瓊脂擴(kuò)散試驗
材料：
1．診斷血清（抗體：抗人IgG或IgA免疫血清）
2．待檢血清（抗原）：人血清
3．參考血清：全國統(tǒng)一人血清免疫球蛋白參考血清（批號不同，免疫球蛋白含量不同）。
4．其它：生理鹽水、瓊脂粉、微量進(jìn)樣器、打孔器、玻璃板、濕盒等。
方法：
1．將適當(dāng)稀釋（事先滴定）的診斷血清與予溶化的2%瓊脂在60℃水浴預(yù)熱數(shù)分鐘后等量混合均勻制成免疫瓊脂板。
2．在免疫瓊脂板上按一定距離（1.2—1.5厘米）打孔，見圖1。3．向孔內(nèi)滴加1：2，1：4，1：8，1：16，1：32稀釋的參考血清及1：10稀釋的待檢血清，每孔10微升，此時加入的抗原液面應(yīng)與瓊脂板一平，不得外溢。
4．已經(jīng)加樣的免疫瓊脂板置濕盒中37℃溫箱擴(kuò)散24小時。
5．測定各孔形成的沉淀環(huán)直徑（mm）,用參考血清各稀釋度測定值繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線，再由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出被檢血清中免疫球蛋白的含量。