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士鋒生物免疫金標(biāo)記檢測方法標(biāo)準(zhǔn)操作程序
最近更新時(shí)間：2013-11-28
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大?。?/span>14.3KB
文件類型：JPG 圖片下載次數(shù)：164次
資料類型：未知文件瀏覽次數(shù)：576次
【目的】
保證免疫金標(biāo)技術(shù)檢驗(yàn)準(zhǔn)確性
【本SOP 適用范圍】
免疫金標(biāo)技術(shù)
【該SOP 變動(dòng)程序】
本標(biāo)準(zhǔn)操作程序的變動(dòng)，可由任一使用本SOP 的工作人員提出，并報(bào)經(jīng)下述人員批準(zhǔn)簽字：專業(yè)主管、科主任。
【原理】
氯化金分子在還原劑作用下聚合形成金顆粒，顆粒與顆粒之間因靜電作用而相互排斥，使其保持一個(gè)比較穩(wěn)定的膠體狀態(tài)，故稱作膠體金。利用膠體金顆粒的高電子密度及其表面能結(jié)合生物大分子（如抗體、SPA、植物血凝素和刀豆蛋白A 等）以 及具有一定顏色等特性，可用光鏡和電鏡對(duì)細(xì)胞內(nèi)抗原進(jìn)行定位、定性的研究。
【方法學(xué)分類】
1. 班點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn) 固相膜免疫測定中液體在微孔膜中穿過流出呈穿流形式，為斑點(diǎn)金免疫滲濾試驗(yàn)（dot immunogold filtration assay，DIGFA），亦有稱免疫金溶膠斑點(diǎn)法、滴金免疫測定法等。試驗(yàn)單位為三層反應(yīng)盒，*層為過濾器（濾紙層），第二層為反應(yīng)膜（NC 膜或MC 膜）上點(diǎn)加有特異性抗原或抗體，第三層為吸水墊料，有稱此滲濾裝置為滴金反應(yīng)板。
以雙抗體夾心法測dsDNA 為例：試驗(yàn)中將標(biāo)本加在反應(yīng)盒上，血清（標(biāo)本）透過過濾層進(jìn)入反應(yīng)層，反應(yīng)層上點(diǎn)有“一”字形抗IgG（或某種人血清蛋白作為試驗(yàn)陽性對(duì)照）及“．”形被測物相應(yīng)抗體，血清中抗原與反應(yīng)層中抗體結(jié)合，其余無關(guān)蛋白等濾出膜片，加入金標(biāo)記抗體試劑，反應(yīng)膜上“一”字形及“．”形均顯紅色為試驗(yàn)陽性，僅“一”形顯紅色為試驗(yàn)陰性（試劑盒狀態(tài)良好），“一”不顯色提示試劑盒質(zhì)量不合格，需另取反應(yīng)盒重做試驗(yàn)。試劑盒基本試劑成分有滴金反應(yīng)板、金標(biāo)記試劑及洗滌液。
2. 斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn) 固相膜免疫測定中液體通過毛細(xì)管作用在膜上向前移行呈橫流形式，為斑點(diǎn)金免疫層析試驗(yàn)（dotimmunogoldchromatographyassay，DIGCA）。試驗(yàn)單位為一濾膜條，自上而下分有多個(gè)層次。
如單克隆雙抗體法測HCG，濾膜條各區(qū)域分別為：吸水濾紙—固定有金標(biāo)二抗的MC 膜—固定有抗β-HCG 抗體的MC 膜—金標(biāo)記抗。α-HCG 玻璃纖維—吸尿玻璃纖維。試驗(yàn)中將濾膜條浸入被測尿液或滴加尿液，尿液在毛細(xì)管作用下向試紙條上端緩緩移行，尿液將金標(biāo)抗。α-HCG 溶解并帶動(dòng)它向前移動(dòng)，結(jié)合尿中HCG 至抗β-HCG 抗體處形成復(fù)合物，并在抗β-HCG 抗體固定處顯示膠體金*紅色，提示試驗(yàn)陽性。尿中無HCG時(shí)，溶解的抗α-HCG 至固定有金標(biāo)二抗的MC膜處顯示膠體金*紅色（質(zhì)控線條），提示試驗(yàn)陰性。
試劑盒基本單位僅有一濾膜條，只有一步操作。
3. 膠體金顆粒的制備
在氯化金溶液中加入不同的還原劑，可制備出不同大小的金顆粒。常采用檸檬酸、抗壞血酸和白磷。用這三種還原劑可分別制備出大、中、小三種主要膠體金顆粒。目前，有更多的實(shí)驗(yàn)室僅以檸檬酸為還原劑，在檸檬酸還原氯化金時(shí)，加入不同量的單寧酸即可獲得大小不同的金顆粒，所制備金顆粒的大小非常一致。