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士鋒生物免疫組織化學技術介紹
最近更新時間：2013-12-2
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大小：14.3KB
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由于免疫組織化學技術具有特異性強、靈敏度高及能將形態(tài)研究與功能、代謝研究有機地結合在一起的顯著特點，所以，這門新技術從一誕生起就顯示出了強大的生命力和廣闊的應用前景。此方法經不斷改進和發(fā)展已日趨成熟，應用范圍逐漸擴大。目前已有近十種技術方法及幾百種標記抗體，技術方法逐步規(guī)范化，標記抗體逐步商品化，現今它已被廣泛地應用于生物學和醫(yī)學研究的許多領域，取得了令人矚目的成就。
一、 免疫組織化學技術的原理和應用范圍
（一） 免疫組織化學技術的基本原理
免疫組織化學技術是用顯色劑標記的特異性抗體在組織細胞原位通過抗原抗體反應和組織化學的呈色反應，對相應抗原進行定性、定位、定量測定的一項技術。即先將組織或細胞中的某些化學物質提取出來，以其作為抗原或半抗原去免疫小鼠等實驗動物，制備特異性抗體，再用這種抗體（*抗體）作為抗原去免疫動物制備第二抗體，并用某種酶（常用辣根過氧化物酶）或生物素等處理后再與前述抗原成分結合，將抗原放大，由于抗體與抗原結合后形成的免疫復合物是無色的，因此，還必須借助于組織化學方法將抗原抗體反應部位顯示出來（常用顯色劑DAB顯示為棕黃色顆粒）。通過抗原抗體反應及呈色反應，顯示細胞或組織中的化學成分，在顯微鏡下可清晰看見細胞內發(fā)生的抗原抗體反應產物，從而能夠在細胞或組織原位確定某些化學成分的分布、含量。組織或細胞中凡是能作抗原或半抗原的物質，如蛋白質、多肽、氨基酸、多糖、磷脂、受體、酶、激素、核酸及病原體等都可用相應的特異性抗體進行檢測。
免疫學的基本原理決定了免疫組織化學技術具有高度特異性，因此，免疫組織化學技術從理論上講也是組織細胞中抗原的特定顯示，如角蛋白（keratin）顯示上皮成分，LCA顯示淋巴細胞成分。只有當組織細胞中存在交叉抗原時才會出現交叉反應。ABC法或SP法的出現，使抗體稀釋上千倍、上萬倍甚至上億倍仍可在組織細胞中與抗原結合，所以免疫組織化學技術又具有敏感性高的特點。免疫組織化學技術通過抗原抗體反應及呈色反應，對組織和細胞中抗原的準確定位，使其可以同時對不同抗原在同一組織或細胞中定位觀察，并進行形態(tài)與功能相結合的研究。
（二）免疫組織化學技術的應用范圍
近年來，隨著抗原的提純和抗體標記技術的改進，特別是自70年代中期雜交瘤技術與單克隆抗體技術的引入，使制備的抗體具有高度的特異性。簡便而敏感的免疫酶標技術能夠用于普通培養(yǎng)細胞（株）、常規(guī)福爾馬林固定石蠟包埋的組織切片、若干年前的存檔標本等，從而使該技術在生物醫(yī)學研究和臨床病理學、微生物學診斷中，日益顯示出巨大的實用價值。目前主要應用在如下幾個方面：
1 確定細胞類型
通過特定抗體標記出細胞內相應抗原成分，以確定細胞類型。如角蛋白是上皮性標記，前列腺特異性抗原僅見于前列腺上皮，甲狀腺球蛋白抗體是甲狀腺濾泡型癌的敏感標記，而降鈣素抗體是甲狀腺髓樣癌的*標記。有些細胞（如表皮內朗格漢斯細胞、黑色素細胞、淋巴結內指突狀和樹突狀網織細胞）光鏡下不易辨認，但免疫組化標記（S-100蛋白等）能清楚顯示其形態(tài)。
2 辨認細胞產物
利用某些細胞產物為抗原制備的抗體，可作為相應產物的特殊標記，如內分泌細胞產生的各種激素，大多數可用免疫組化技術標記出來，據此可對內分泌腫瘤作功能分類，檢測分泌異位激素的腫瘤等。
3 了解分化程度
大多數標記物都有其特定的分布部位，如上皮細胞膜抗原（EMA）著色部位在細胞膜上，但差分化乳癌胞漿內也可出現陽性顆粒；角蛋白的含量也與分化程度有關，低分化或未分化癌含量較低、染色較弱。
4 鑒定病變性質
通過標記Ig輕鏈（κ、λ）可區(qū)分部分B細胞性淋巴瘤與B細胞反應性增生，前者常表達單一的Ig輕鏈（κ+/λ+），后者常為多克隆Ig輕鏈（κ+、λ+）。而標記bcl-2蛋白在區(qū)別濾泡型淋巴瘤和反應性濾泡增生上有相當的意義。在濾泡型淋巴瘤，90%以上腫瘤性濾泡細胞有bcl-2的高表達；而在濾泡反應性增生時，濾泡反應中心的細胞不表達bcl-2蛋白，而套細胞則表達。
5 發(fā)現微小轉移灶
某些癌的早期轉移有時與淋巴結內竇性組織細胞增生不易區(qū)別。用常規(guī)病理組織學方法要在一個組織中認出單個轉移性腫瘤細胞或幾個細胞是不可能的，而采用免疫組化方法（如用上皮性標志）則十分有助于微?。ò┺D移灶的發(fā)現。對轉移性腫瘤也可借助免疫組化標志尋找原發(fā)瘤，如骨組織內有前列腺特異性抗原陽性細胞，提示前列腺癌轉移。
6 探討腫瘤起源或分化表型
一些來源不明的腫瘤長期爭論不休，zui后通過免疫組化標記取得共識。如顆粒性肌母細胞瘤，曾被認為是肌源性的，但該腫瘤肌源性標記陰性，而神經性標記陽性，證明為神經來源（可能來自神經鞘細胞）。分化很差的腫瘤病理上常按細胞形態(tài)分為梭形細胞腫瘤、小圓細胞腫瘤等，通過多種標記的聯合應用，也可能確定其來源。
7 確定腫瘤分期
判斷腫瘤是原位還是浸潤及有無血管、淋巴管侵襲與腫瘤分期密切相關。用常規(guī)病理方法判斷有時是十分困難的，但用免疫組化法可獲得明確結果。如采用層粘連蛋白和Ⅳ型膠原的單克隆抗體可清楚顯示基底膜的主要成分，一旦證實上皮性癌突破了基底膜，就不是原位癌，而是浸潤癌了，其預后是不同的。用第八因子相關蛋白、荊豆凝集素等顯示血管和淋巴管內皮細胞的標記物則可清楚顯示腫瘤對血管或淋巴管的浸潤。對許多腫瘤的良惡性鑒別及有無血管或淋巴管浸潤，這是主要的鑒別依據，同時也有治療及預后意義。