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士鋒生物細(xì)胞融合實(shí)驗(yàn)流程
最近更新時(shí)間：2013-12-12
提 供 商：上海士鋒生物科技有限公司資料大小：50.6KB
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一、原理
細(xì)胞融合（Cell fusion），即在自然條件下或用人工方法（生物的、物理的、化學(xué)的）使兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞合并形成一個(gè)細(xì)胞的過程。人工誘導(dǎo)的細(xì)胞融合，在六十年代作為一門新興技術(shù)而發(fā)展起來。由于它不僅能產(chǎn)生同種細(xì)胞融合，也能產(chǎn)生種間細(xì)胞的融合，因此細(xì)胞融合技術(shù)目前被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域。
細(xì)胞融合的誘導(dǎo)物種類很多.常用的主要有滅活的仙臺病毒（Sendai virus），聚乙二醇（Polyethyleneglycol，PEG）和電脈沖。目前應(yīng)用zui廣泛的是聚乙二醇，因?yàn)樗椎谩⒑啽?，且融合效果穩(wěn)定。PEG的促融機(jī)制尚不*清楚，它可能引起細(xì)胞膜中磷脂的酰鍵及極性基團(tuán)發(fā)生結(jié)構(gòu)重排。
二、方法
（1）取新鮮雞血以0.85%生理鹽水制成10%的懸液。
（2）稱取0.5克PEG（MW=4,000）放入試管內(nèi)，在酒精燈上融化之，迅速加入0.5ml預(yù)熱的hanks液混勻制成50%的PEG溶液。放入37℃水浴中待用。
（3）取上述10%的雞紅細(xì)胞懸液1ml放入離心管中，再加入5ml hanks液混勻，然后以1,000rpm離心5分鐘，小心棄去上清，用指彈法將細(xì)胞團(tuán)塊彈散。
（4）取上述50%PEG溶液0.5ml，在1分鐘內(nèi)滴加到雞紅細(xì)胞懸液，邊加邊輕輕搖動(dòng)混勻。待PEG全部加入后靜置1分鐘左右。此全部過程都要求在37℃水浴內(nèi)進(jìn)行。
（5）緩慢滴加9ml Hanks液以終止PEG的作用，在37℃水浴內(nèi)靜置5分鐘。
（6）離心棄上清后，取一滴融合后的細(xì)胞懸液滴片，加蓋片鏡檢。
三、結(jié)果觀察
在高倍鏡下可以看到有兩個(gè)或兩個(gè)以上的雞紅細(xì)胞膜融合在一起，形成一個(gè)異核體細(xì)胞。要注意辨別融合細(xì)胞與重疊的雞紅細(xì)胞。
四、融合率的計(jì)算
在高倍鏡下隨機(jī)計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞（包括融合的與未融合的細(xì)胞），以融合細(xì)胞（含兩個(gè)或兩個(gè)以上的細(xì)胞核的細(xì)胞）的細(xì)胞核數(shù)除以總細(xì)胞核數(shù)（包括融合與未融合的細(xì)胞核）即得出融合率。