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士鋒生物免疫球蛋白含量定量檢測(cè)規(guī)程
最近更新時(shí)間:2013-12-27
提 供 商:上海士鋒生物科技有限公司資料大小:50.6KB
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適用范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了保健食品中免疫球蛋白 IgG的測(cè)定方法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于片劑、膠囊、粉劑類型保健食品中免疫球蛋白 IgG的測(cè)定。
本方法檢出限:當(dāng)取樣量 0.1g,稀釋至25mL,進(jìn)樣量20μL時(shí),檢出濃度為0.5mg/mL。
原理
根據(jù)親和色譜的原理,在磷酸鹽緩沖液條件下免疫球蛋白 IgG與配基連接,在pH2.5的鹽酸甘氨酸條件下洗脫免疫球蛋白IgG。
試劑
流動(dòng)相 A:pH6.5 0.05mol/L 磷酸鹽緩沖液
流動(dòng)相 B:pH2.5 0.05mol/L 甘氨酸鹽酸緩沖液
IgG標(biāo)準(zhǔn)貯備液:稱取IgG標(biāo)準(zhǔn)品(Sigma化學(xué)公司)0.0100g,用流動(dòng)相A(3.1)溶解并定容至10.0mL,搖勻,濃度為1.0mg/mL。
IgG標(biāo)準(zhǔn)系列溶液:取IgG標(biāo)準(zhǔn)貯備液,用用流動(dòng)相A(3.1)稀釋成含IgG 0.2, 0.4, 0.6, 0.8, 1.0mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)系列。臨用時(shí)配制。
儀器和設(shè)備
液相色譜儀具紫外檢測(cè)器和梯度洗脫裝置。
分析步驟
試樣處理:稱取 0.1g(至0.001g)試樣,用流動(dòng)相A(3.1)稀釋至25.0mL,搖勻,通過(guò)0.45μm微孔濾膜后進(jìn)樣。
5.2.1 先用5倍柱體積的重蒸水洗柱,再用10倍柱體積的流動(dòng)相A(3.1)平衡柱,進(jìn)樣,按洗脫程序進(jìn)行洗脫。
5.2.2 HPLC參考條件
色譜柱: Pharmacia HI-Trap Protein G柱,1mL。
波長(zhǎng): 280nm
進(jìn)樣量: 20μL
梯度洗脫表:
Time Flow mL/min A% B% Gradient
0 0.4 100 0 ※
4.5 0.4 100 0 6
5.5 0.4 0 100 6
15.0 0.4 0 100 6
15.5 0.4 100 0 6
22.0 0.4 100 0 6
結(jié)果計(jì)算
C × V × 100
x= ─────——──
m × 1000
式中 x:試樣中IgG的含量,g/100g;
m:試樣的質(zhì)量,g;
C:被測(cè)液中IgG的含量,mg/mL;
V:試樣定容的體積,mL。
計(jì)算結(jié)果保留二位有效數(shù)字。
精密度
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨(dú)立測(cè)定結(jié)果的差值不得超過(guò)算術(shù)平均值的 10%。