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士鋒生物酶聯(lián)接免疫吸附劑測定[ELISA]的原理和類型
最近更新時間：2014-1-19
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1.1. elisa的原理
ELISA的基礎(chǔ)是抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性，酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本(測定其中的抗體或抗原)與固相載體表面的抗原或抗體起反應(yīng)。用洗滌的方法使固相載體上形成的抗原抗體復合物與液體中的其他物質(zhì)分開。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應(yīng)而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了免疫反應(yīng)的結(jié)果，使測定方法達到很高的敏感度。
1.2. ELISA的類型
ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。在這種測定方法中有三個必要的試劑：(1)固相的抗原或抗體，即"免疫吸附劑"(immunosorbent);(2)酶標記的抗原或抗體，稱為“酶聯(lián)物”、“結(jié)合物”(conjugate);(3)酶反應(yīng)的底物。根據(jù)試劑的來源和標本的情況以及檢測的具體條件，可設(shè)計出各種不同類型的檢測方法。用于臨床檢驗的ELISA主要有以下幾種類型：
1.2.1 雙抗體夾心法測抗原
<img alt="酶聯(lián)接免疫吸附劑測定[ELISA]的原理和類型" 酶聯(lián)接免疫吸附劑測定[elisa]的原理和類型"="" border="1" height="217" data-cke-saved-src="http://www.bio1000.com/uploads/allimg/120516/142H21493-0.jpg" src="http://www.bio1000.com/uploads/allimg/120516/142H21493-0.jpg" width="450" style="vertical-align: middle; border: 0px;">
雙抗體夾心法是檢測抗原zui常用的方法，操作步驟如下：
1) 將特異性抗體與固相載體聯(lián)結(jié)，形成固相抗體。洗滌除去未結(jié)合的抗體及雜質(zhì)。
2) 加受檢標本，保溫反應(yīng)。標本中的抗原與固相抗體結(jié)合，形成固相抗原抗體復合物。洗滌除去其他未結(jié)合物質(zhì)。
3) 加酶標抗體，保溫反應(yīng)。固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結(jié)合。*洗滌未結(jié)合的酶標抗體。此時固相載體上帶有的酶量與標本中受檢抗原的量相關(guān)。
4) 加底物顯色。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過比色，測知標本中抗原的量。
在臨床檢驗中，此法適用于檢驗各種蛋白質(zhì)等大分子抗原，例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對受檢抗原的異性抗體，就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。如抗體的來源為抗血清，包被和酶標用的抗體分別取自不同種屬的動物。如應(yīng)用單克隆抗體，一般選擇兩個針對抗原上不同決定簇的單抗，分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物。這種雙位點夾心法具有很高的特異性，而且可以將受檢標本和酶標抗體一起保溫反應(yīng)，作一步法檢測。