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士鋒生物細(xì)菌形態(tài)學(xué)觀察技術(shù)
最近更新時(shí)間:2014-3-25
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將細(xì)菌培養(yǎng)物或含菌標(biāo)本材料制備的染色標(biāo)本片,置顯微鏡油鏡頭下,可以觀察到細(xì)菌的形狀、大小、結(jié)構(gòu)、排列及染色特性等,了解這些特征有助于鑒別各種細(xì)菌。
一、顯微鏡油鏡頭的使用與保護(hù)
【使用原理】
用油鏡觀察標(biāo)本、是在使用高倍鏡的基礎(chǔ)上,采用同玻璃折光率相似的油狀物(如香柏油、液體石臘等),滴加在標(biāo)本與油鏡頭中間,以避免光線散射,提高顯微鏡的清晰度和分辨能力。使觀察物象更加清楚明了。
【操作方法】
1. 調(diào)試:打開電源,先采用低倍鏡,使視野達(dá)到清晰光亮。
2. 加油:雙手向上轉(zhuǎn)動(dòng)粗螺旋,使鏡筒上升,將標(biāo)本片固定于載物臺(tái)上,使染色面對(duì)準(zhǔn)集光器央,加鏡油于標(biāo)本面,調(diào)換油鏡頭對(duì)準(zhǔn)標(biāo)本面。
3. 調(diào)焦點(diǎn):用左手向下輕轉(zhuǎn)粗螺旋,使鏡筒下降,同時(shí)眼睛從右側(cè)觀察下降程度,待鏡頭入油后接觸上玻片,用眼觀目鏡,反轉(zhuǎn)粗螺旋,使鏡筒慢慢上升,待看到模糊物象時(shí),改用細(xì)螺旋上下調(diào)節(jié),使物像達(dá)到*清晰為宜(一般轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)調(diào)節(jié)前后半圈)。
4. 觀察:觀察時(shí)只使用細(xì)調(diào)。需改換視野時(shí),右手操縱推進(jìn)器,左手轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)螺旋,做到配合自如。并養(yǎng)成左眼觀察,右眼繪圖的習(xí)慣。
【油鏡頭的保護(hù)】
油鏡頭使用完結(jié)后,必須用擦鏡紙滴加少量二甲苯將油擦洗干凈(二甲苯用量宜少,以免鏡片間粘膠溶解)。下降集光器,半接物鏡轉(zhuǎn)成“八”字,再下降鏡筒,輕觸鏡臺(tái)表面,雙手平持顯微放入鏡箱,避免直射日光,置于干燥處,以防受潮。
【注意事項(xiàng)】
1. 使用直筒顯微鏡觀察標(biāo)本時(shí),必須兩眼同時(shí)睜開,訓(xùn)練使用左眼觀察,右眼繪圖。如用油鏡頭觀察,勿將鏡身歪斜,避免鏡油流出片面。
2. 觀察染色標(biāo)本時(shí),光線宜強(qiáng),可上升集光器,開大光圈。觀察不染色標(biāo)本時(shí),光源宜弱,可下降集光器,縮小光圈。
3. 使用完畢,一定擦去鏡油。
二、細(xì)菌不染色標(biāo)本
不染色的細(xì)菌和標(biāo)本鏡檢,雖可觀察細(xì)菌在自然生活狀態(tài)下的大小、形態(tài)、活動(dòng)等,但主要用于觀察細(xì)菌的動(dòng)力。
(一)懸滴法
【材料】
1. 細(xì)菌:枯草桿菌8~12小時(shí)肉湯培養(yǎng)物。
2. 凹玻片,蓋玻片,凡士林等。
【方法】
1. 取凹玻片一張,于凹窩周圍涂少許凡士林(見圖1)。
2. 用接種環(huán)沾取枯草桿菌8~12小時(shí)培養(yǎng)物,置于蓋玻片中央。
3. 反轉(zhuǎn)凹玻片,使凹窩對(duì)準(zhǔn)蓋玻片中央,蓋于其上,輕壓后,迅速翻轉(zhuǎn)玻片,使蓋破片面向上。
4. 標(biāo)本片置于顯微鏡載物臺(tái)上,先用弱光線,低倍鏡找物象,再改換高倍鏡觀察,密切注意,勿壓破蓋玻片。
5. 觀察:細(xì)菌在鏡下為灰色半透明體,并呈現(xiàn)真運(yùn)動(dòng),如在明亮的海洋中,深入淺出游來動(dòng)去。
(二)壓滴法
用途同懸滴法。
【材料】
1. 細(xì)菌:枯草桿菌8~12小時(shí)肉湯培養(yǎng)物。
2. 載物玻片:蓋玻片等。
【方法】
1. 取無油污物玻片1張。
2. 用接種環(huán)沾取枯草桿菌8~12小時(shí)肉湯培養(yǎng)物置于載物玻片中央。
3. 加蓋玻片于菌液表面,觀察方法同懸滴法。
三、細(xì)菌染色標(biāo)本片的制備(操作)
由于細(xì)菌個(gè)體微小,基本上無色透明,故將其用適當(dāng)染料染色觀察,方能顯示它的形態(tài)、大小、構(gòu)造及染色特性等,在細(xì)菌和鑒別上有重要意義。